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瑾因病毒载体的构建及其在肝细胞中的表达鉴定删,,共转染细胞得到高滴度病毒,转导赴秆〕龇疏R蛉毕菪拖赴=崧郏豪寐《窘榈嫉腞际醭晒ǹ醭觯鱆【摘要】目的:构建瑾因《颈泶镌靥澹Q芯縎在三氯乙烯毒性机制中的作用提供技术支持。方法:通过建了瑾因缺陷型细胞。刘建军/蒋英芝/叶金波/李黄海燕/黄新凤是蛋首次鉴定于伴有该胞生理活动的重要调节因子,也是组蛋白乙酰转移酶染色体易位的未分化型白血病患者而命名”抑制剂,影响谆胱B汲聊凇啊H纫蚁白磷酸酶特异的抑制蛋白,涉及细胞凋亡、肿瘤发生、转录调节、核小体装配、组蛋白结合阳等多种生物功能,是细剂,也是一种职业毒物和环境化学污染物,生物监测资料表明,美国、中国、德国人群血和尿中均发现有杰/杨细飞/周【关键词】籖干扰;【縎;基因,行Ш荊趴卧酷,是工业上广泛应用的有机溶丽/钲谑屑膊≡し揽刂浦行纳钲谑邢执纠硌е氐实验室,广东深圳琘检索蛄校杓坪铣对危嘶鸷罅拥铰《驹靥錺猻。挑取筛选的单菌落,经筒庑鉴定后提取质粒。将质粒共转染至赴占《旧锨澹5既隠一肝细胞中,利用嘌呤霉素筛选得到毕菪拖赴后利用荧光定量蚖鉴定干扰效果。结果:筒庑蚪峁っ魉磗确插入慢病毒载体—中图分类号:;文章编号:———;;.,,琀文献标识码:琷..—...瑆琣..瑃瑃..簊—.:——;修订日期:——基金项目:国家自然科学基金资助项实验室提升发展项目作者简介:刘建军,女,广东人,研究员,研究方向组学。猰篵—.深圳市重点疾病蛋白质乙心癌变■变寞变●●‘■
万方数据
’蠧眦R灰唬弧R籹瑾因缺陷型细胞株,为探索赥肝细胞毒性圈■圈靶向舾瑾因的押塑账崃吹纳杓萍昂铣牧嫌敕椒酆厦缸B贾兄刮坏"鑫第卷第嬖凇,实验证明捌浯徊锟梢鹨糯ǘ性,具有致癌、致突变等作用嘲。年,美国国家环保局正式确定H死嘀掳┪”⑾諸可诱导肝细胞达上调,并证实荰致肝细胞毒性的一个关键蛋白Α,怯氚谢蛐列同源的双链—琩导的特异性的转录后基因沉默现象猼制基因的表达及其功能研究。本文构建了可长效稳定特异性抑制鞍妆泶锏膕表达载体,并筛选中的作用及亩拘曰铺峁┗『凸ぞ摺细胞伺呱鱿赴和一细胞一,人肝细胞鹤灾泄蒲г荷虾O赴猓宦《颈泶镏柿载体—和包含包装混合质粒的慢病毒转染包装试剂盒购自公司。一培养基粉和胎牛血清购自荆琀标记的山羊抗鼠二抗购自荆珽试剂盒和鼠抗豢构公司,兔抗豢构鹤訥司,籇定量试剂盒购自公司,逆转录试剂盒和荧光定量约梁泄鹤员ι锕こ大连邢薰荆种工具酶购自公司,夯厥试剂盒购自公司,押塑账岷铣珊蚒柱式质粒小量抽提试剂盒来自上海生工生物有限公司。生物安全柜,实时荧光定量公司琍扩增仪公司ü獾怪孟晕⒕奥林巴斯公司克低装置公司在核酸数据库胁檎业絊的全序輘州杓圃碔皐..在线设计软件寻找匾煨詓靶序列,经葱员榷院螅τ肦软件对靶序列的二级结构进行评估,最后得到靶序列,分别是:靶点位靶点位靶点位置:硗獠槲南椎昧教跽攵許基因的干扰靶序列,分别是:靶点位置:珿傻阄置:6杂诿扛鲅《ǖ膕序列,设计合成两条腄模板单链,设计如下:盖位点靶序列セ方峁筄靶序列互盖形坏愕个区域,分别命名为、、、、,另外设计对照序歹,不针对人任何基因寡核苷酸链由上海生工公司合成。靶向艇虻膕寡核苷酸链序列:葑坠竺垒型垒铙每竖莸┦坚用—缓冲液溶解合成的押塑账链,终浓度为/0吹任镏实牧