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拟南芥基因定位表达载体的构建杨礼香,王正询’,柯德森,巫锦雄不蚬菇ǖ街参锉泶镌靥錺中,并将该拟南芥狝啦融合表达载体的构阒荽笱蒲аг汗阒分子伴侣参与包括蛋白质折叠,跨膜转运以及蛋白质降解等生物过程,在维持蛋白质的内稳态方面起着重要的作用¨,。在环境胁迫下,分子伴侣能稳定蛋白质结构,防止蛋白质变性,从而保护细胞。分子伴侣包括高度保守的娜刃菘说鞍捌浜献骰锇镴一蛋白,也称为/。鞍字誓艽碳的富钚裕佣榷ㄆ溆肽勘甑牡鞍字氏嗷プ是最早在拟南芥中发现的坏鞍字一Q芯勘砻鳎嫒燃ぴ诤芏痰氖奔就能提高拟南芥叶中的水平,达到最大值,其后表达量有所下降。。除了℃热激外,冷处理、水分胁迫都能提高拟南芥叶中基因的表达水平,因此可能参与多种环境刺激的响应,其功能可能与多种胁迫的抗性相关哺N进一步研究该基因的功能,本研究将不带终止子的基因置于躺ü獾鞍谆虻钠舳又啊得到重组质粒后,将其转入拟南芥中进行定位研究。牧嫌敕椒材料野生型拟南芥狢E嘌姨跫#妫诎怠总崛∈约梁校琔街柿P×抽提试剂盒、一柱式夯厥帐约梁小喙厥约梁鸵锏却由虾I锕こ逃邢薰购人;认拗菩阅谇忻福琓用福等购于大连宝生物公司;其他试剂为国产分析纯试剂。基因的扩增及狝墓菇按照总崛∈约梁械牟僮魉得魈崛∧饽芥幼苗的总H∈柿孔躌在琼脂糖凝胶中电泳,检测奶崛∏榭觥A砣∈柿孔躌在紫外分光光度计上测定和比值。根据中的全序列设计不带终止子的引物,上下游引物均引入拿盖形坏恪R物序歹缦拢篈一;籆’R阅南芥幼苗的总D0澹凑漳孀B际约梁械牟作步骤逆转录生成,并以此为模板进行扩增基因的不带终止子的开放阅读框厥帐约梁谢厥誔产物,并将此回收产物连接到猅载体上。连接后的产物转化￡感受态细胞,经过菌落秆⊙粜钥寺。盖屑后进一步送测序鉴定。建用忧懊娌庑蛘返腡~质粒上酶切并回收片段,然后将片段连入经过盖胁⑷チ姿峄砗蟮谋泶镌靥錺的盖形坏悖⒆;。先用的自身引物进行菌落粞∮胁迦氲目隆。再用的自身前向引物和载体上的摘要:是拟南芥中的一种分子伴侣,参与了许多重要的生命活动,但其具体的作用机制还不清楚。为进一步研究该蛋白的功能,我们构建了该基因的定位表达载体,拟对该基因在拟南芥中的定位进行研究。将该基因构建到带有绿色荧光蛋白虻闹柿1泶镌靥錺中,并将此重组质粒通过农杆菌介导转入拟南芥中,得到了转基因植株,为后续该基因的定位研究奠定基础。关键词:颍荒饽辖妫欢ㄎ中图分类号:文献标识码:文章编号:———用’。照/氨基酸和生物资源,收稿日期:——作者简介:杨礼香,女,讲师,博士,主要从事植物生物化学和分子生物学研究。基金项日:广东省自然科学基金项目;广州市属高校科技计划籆—/
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物,对前面鉴定有插入的克隆进行菌落范插入片段的方向。用的自身前向引物和载体上的锬芾┰龀瞿康拇木褪钦虿迦搿H果是反向插入的,则不能扩增出目的带。扩大培养有正向插入的菌落,提取质粒,用忻盖鉴定。接种含有正确重组质粒的单菌落,大量提取质粒,用于转化。转化拟南芥将构建好的狝柿WH肱└司中,并采用椒ň转化拟南芥。收获转化后的拟南芥种子,并用卡那霉素转基因拟南芥植株逐代进行鉴定和筛选,得到纯合株系。峁敕治基因的扩增及狝墓菇拟南芥幼苗总谇碇悄荷系缬竞螅紫外光下清晰呈现及等特异条带。分光光度计检测的和比值为砻魉崛〉淖躌符合要求,可进行下一步的实验。通过┰霾⒋炕厥片段。扩增产物大小约为,与预期大小相符。将扩增产物