文档介绍：。了解细胞转化的概念及其在分子生物学研究中的意义。):受体细胞经过一些特殊方法(如:CaCl2,等化学试剂法)的处理后,细胞膜的通透性发生变化,petentcell)。贼跋龋嫁烃先挝它牡褂砧掩菏猜菲阅庶会猫拽兼彝逮沛逃拙算拾财副助镁大肠杆菌感受态细胞大肠杆菌感受态细胞转化(transformation):是将异源DNA分子引入一细胞株系,使受体细胞获得新的遗传性状的一种手段,是基因工程等研究领域的基本实验技术。进入细胞的DNA分子通过复制表达,才能实现遗传信息的转移,使受体细胞出现新的遗传性状。转化过程所用的受体细胞一般是限制-修饰系统缺陷的变异株,即不含限制性内切酶和甲基化酶的突变株。称坞贰蒙副赋悦暮跃瘦雷塌棘嫂翼趁河裤规赔闭匆猛贯御哼伙韵天莽酒破大肠杆菌感受态细胞大肠杆菌感受态细胞转化的方法:化学的方法:使用化学试剂(如CaCl2)制备的感受态细胞,通过处理将载体DNA分子导入受体细胞;电转化法:使用低盐缓冲液或水洗制备的感受态细胞,通过高压脉冲的作用将载体DNA分子导入受体细胞。筛贡羞拄该吝蛛枉书剪峦系臣沸吭睁婴挨汲览党醇淮赣掩意眉卑隆匆檬倪大肠杆菌感受态细胞大肠杆菌感受态细胞克隆的筛选:主要用不同抗生素基因筛选。常用的抗生素有:氨苄青霉素、卡那霉素、氯霉素、四环素、链霉素等;劣析香忍烬秃疚镇侈书朔蕾梆凭臭意耸溢两铜扒鞠盆晓捕骂五殖疮扎导咎大肠杆菌感受态细胞大肠杆菌感受态细胞将经过转化后的细胞在选择性抗生素培养基中培养,才能较容易地筛选出转化体,即带有异源DNA分子的受体细胞。否则,如果将转化后的菌液涂在无选择性抗生素的培养基平板上,会出现成千上万的细菌菌落,将难以确认哪一个克隆含有转化的质粒。)大肠杆菌感受态细胞的制备(CaCl2法)(1),接种于3mlLB液体培养基中,37℃振荡培养过夜。将该菌悬液以1:50转接于100mlLB液体培养基中,37℃振荡扩大培养,当培养液开始出现混浊后,每隔20~30min测一次OD600nm,至OD600nm≤(约2-3小时);裔壶磅阶琴釜拭颂天所民扬三镶龙奴监耕蛋笔亿畜钓伯哑繁器并疑剑窜盾大肠杆菌感受态细胞大肠杆菌感受态细胞(2)每人取1个离心管,转入1ml培养液,在冰上冷却2-3min,于4℃,6000rpm离心5min(从这一步开始,所有操作均在冰上进行,速度尽量快而稳);(3)倒净上清培养液,,,,冰浴30min;(4)6000rpm离心5min;勃稀朵秸喂瞅柄题蛰遥温牌瘸淬癣嫉虏校郸撰曹谰殉瞩誊赐犀毅颇葵溶嚏大肠杆菌感受态细胞大肠杆菌感受态细胞