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人一鞍自吮泶锛捌涞タ寺】固逯票·激光生物学报痡..吴俊文矸飄,熊璎珞辰,邱义兰跏ぷ恕В铎莌,刘如石摘要:为获得分泌抗人猘蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞,通过在大肠杆菌中原核表达人关键词:原核表达;电洗脱;单克隆抗体;中图分类号:.文献标识码:文章编号:#,湖南长沙蛋白,以纯化的人猘蛋白作为抗原免疫/∈蟆>赴娜诤霞吧秆』竦株能稳定分泌抗人猘蛋白的杂交瘤细胞,命名为2捎眉浣覧和方法对的特异性、稳定性和适用范围进行鉴定。结果显示:蛋白的相对分子质量为扇苡疞尿素;杂交瘤细胞上清的抗体效价为,腹水的抗体效价为患浣覧结果表明,杂交瘤细胞在体外传代或液氮冻存鲈后,分泌的抗体效价不变;℃保存螅固宓男Ъ劭J枷陆怠结果显示,单克隆抗体识别人、鼠、兔和鱼的鞍祝肫浞⑸匾煨苑从Α分泌的单克隆抗体可以广泛的应用于细胞生物学和免疫学试验,具有良好的应用价值。。,.,珻.;收稿日期:;修回日期:基金项目:国家自然科学基金资助项目;湖南省科技计划重点项目资助;长沙市科技计划重点项目甂缓鲜「叩妊?:吴俊文,男,湖南桃源人,湖南师范大学微生物学专业硕士研究生。ㄑ蹲髡撸毫跞缡一校狭霸慈耍鲜Ψ洞笱蒲аг翰┦浚淌冢妒可际Γ恢饕4邮路肿病毒学和基因工程药物研究。,羒。,。,琇,。:,猘甒瓹,,珻;甅,/甤瓵,,甌瑂篢緂疞甌畐畐痜.—琺瑀一..
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牧嫌敕椒主要试剂甌タ寺】固濉目的蛋白诱导表达与产物的猙鉴定挑取筛选的单克隆菌株,接种到础凹《鞍住笔且恢种械却笮〉牡鞍字剩外观呈哑铃状,由一个高度保守的基因编码氨基酸组成。单体肌动蛋白的相对分子质量为腥鼋岷衔坏悖渲幸桓鍪茿结合位点。肌动蛋白不仅是细胞骨架的主要组成部分,而且还构成了肌细胞中具有收缩功能的组织。肌动蛋白对于细胞活动起到很大的作用,比如细胞的转移和分裂,原生质体的流动,动物胞囊和器官的运动,细胞问信息的传递,以及细胞的形态的建立等。唤龃嬖谟谙赴手校以嚼丛蕉嗟闹ぞ荼明谙赴酥幸簿哂兄匾5淖饔谩轏。除了线虫类精子细胞,在所有的真核细胞当中均发现有肌动蛋白存在。在生物分子演化过程中,肌动蛋白是被高度保留下来的蛋白质分子之一,从藻类细胞到人体细胞肌动蛋白只有不到%的变化可以分为郑珺—汀猰惴悍布于各种组织中,其余志哂胁煌∪庾橹匾性。猘在肌细胞中占总蛋白的%,即使在非肌细胞中,肌动蛋白也占细胞总蛋白的ァ%。猘在各组织和细胞中的表达相对恒定,在研究真核生物基因表达调控和疾病发生相关基因表达的变化时,猘蛋白则用来作为蛋白表达水平变化的常用参照,因而抗猘蛋白的单克隆抗体具有巨大的市场要求和经济效益。本研究利用原核重组表达技术,表达了人猘鞍祝玫鞍字饕R园宓男问酱嬖冢扇苡尿素。电洗脱纯化后的人鞍状锏街票单抗的要求,实验显示该蛋白具有很强的免疫反应性。纯化后的人鞍酌庖連痗小鼠,通过杂交瘤技术籎,筛选到株分泌抗人鞍椎タ寺】固宓脑咏涣鱿赴云渲株性状优良的杂交瘤细胞进行生物学特性鉴定。材料菌种和细胞株大肠杆菌甤菌株由本实验室保存,疨小鼠骨髓瘤细胞由厦门大学夏宁邵教授惠赠。谎蚩故笥上妹糯笱哪劢淌诨菰籘头转录试剂盒购自公司;载体、酶、连接酶、拗菩阅谇忻腹喊公司;夯厥帐约梁杏胫柿L崛∈詍盒购自上海生工;标准单克隆抗体购自公司;蛋白质相对分子质量标准购自公司;狣底物显色试剂盒购自司;Х