文档介绍：獯笄硕士学位论文人鞍椎谋泶锛暗タ寺】固宓闹票王胜至麴援塞焦亟±篞鱼:评阅人分类号:墼窆密级:公珏:鱼当岛号:柜孤黁窆軶三三
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作者姓名:秦伟指导教师:王胜军教授毛朝明副主任技师,许化溪教授申请学位:学科专业:免疫学论文提交日期:..论文答辩日期:..学位授予单位:江苏大学学位授予日期:..答辩委员会主席:邵启祥评阅人小组成员:硕士
摘要目的:表达和纯化人舛诤系鞍祝票感∈抗人タ寺】固澹=徊窖芯咳薝的生物学功能及临床应用奠定实验基础。方法:薝胞外段虻目寺『驮吮泶铮翰捎方法,从人结肠癌细胞株谢竦萌薝胞外段~基因,并克隆至载体,再转化至大肠杆菌≡裱粜钥寺〗忻盖屑ê~核酸序列,连接至表达载体稀>庑蚣ǎ粜灾刈橹柿W、℃,∈庇盏寄康牡鞍妆达;将表达的蛋白用写炕⒏葱裕⑼ü齏进行鉴定。タ寺】固宓闹票福喝薝船~诤系鞍酌庖連痗小鼠,应用杂交瘤技术,将免疫小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合,并通过间接ㄉ秆》置谛∈罂谷薝抗体的杂交瘤细胞株,扩大培养并冻存。将成功分泌抗人鞍椎タ寺】固宓脑咏瘤细胞注射健康/∈蟾骨荒冢街茏笥也顾8顾缀筒阄鲋徊酱炕蠡竦酶顾涂固濉流式细胞术和对免疫组化染色对单克隆抗体进行鉴定。氨基酸残基,与泄ú嫉男験化至大肠杆菌タ寺】固宓募ǎ和ü浣用噶C庖呶绞匝椤结果:晒寺∪薝~颍浔嗦肭,。成功构建了龃~畃原核表达载体,表达相对分子质量约的融合蛋白。该蛋白表达量高,复性后的弛~江苏大学硕士学位论文/,
蛋白浓度约为痬>庖咝∈笱G逍Ъ鄣牟舛ǎな蹈玫鞍具有很强的免疫原性。结果显示所制备抗体能与原核表达蛋白特异性结合。浣覧法检测其抗血清效价,%,经过问接ǚ锤瓷秆。粜月饰%,对其中暝咏涣鱿赴次克隆化,获得两株稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株..和..A街甑タ寺】固迨别不同的抗原表位,其腹水效价分别为...:结果显示在赴泶锿暾烊还瓜骽蛋白的分子量笥椅恢糜心康奶醮浣又っ鹘岷系姆肿邮。流式细胞术分析显示这两株抗体分别能识别人结肠癌细胞株徒嶂背Π┰赴鸘分子。免疫组织化学染色结果显示所制备的单克隆抗体也可识别结直肠癌组织标本细胞膜上肿印Q橹ち怂票傅腂瓼瓼虰瓹瓺单克隆抗体可结论:成功构建了原核表达载体甎~⒒竦酶叽慷鹊娜甎的~诤系鞍祝怀晒χ票噶诵∈罂谷薝分子的单克隆抗体。证实所制备的抗体不仅能识别人结肠癌细胞株夷芴匾斓厥侗鹑肆俅步嶂背Π┳橹赴け砻娴肿印タ寺】固宓某晒χ票福=徊缴钊胙芯咳肿拥纳镅Чδ芗捌湓谥琢龇⑸⒄怪械淖饔么丛炝颂跫关键词:人鞍妆泶铮タ寺】固甒识别细胞表面的肿印瓹瓺虻目寺。泶铮タ寺】固宓闹票讣凹