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大鼠骨髓基质细胞体外培养及分化研究
石红光吕渭莉黄磊
广州市第一人民医院口腔科广东广州
摘要目的研究大鼠骨髓基质细胞,的生物学特性及其成骨和成脂
分化能力。方法处死只月龄大鼠动物,非连续密度梯度离心分离大鼠,传代后分别在成
骨及成脂培养基中诱导培养天,观察细胞形态,绘制细胞生长曲线,通过组织特染对的成骨、成
脂表型进行鉴定,计数阳性染色细胞百分比。结果大鼠在体外具有成骨细胞分化潜力,油红染
色显示成脂诱导培养基可定向诱导其分化。结论本实验成功分离大鼠且保持分化能力。
关键词骨髓基质细胞成体干细胞成脂肪表型

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—一.
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中图分类号:. 文献标识码: 文章编号:—
多项研究表明, 绝经后骨质疏松症可导致骨髓基质细胞中骨祖细胞数量减少,成骨能力
,与颌骨骨量下降,成脂能力增强,这是老年骨质疏松症的重要
的减少及牙周炎的发生有一定的相关性,引。绝经后女原因之一。本实验旨在观察大鼠中骨髓基质细胞的
性骨量减少同时常伴有骨髓中脂肪组织的增多,其成骨及成脂能力,为组织工程治疗骨质疏松症寻找种
分子机制尚未明了。已有实验证实,动物的年龄增长子细胞。
课题项目:广州市医药卫生科技项目编号:
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国际医药卫生导报年第卷第期半月刊
材料和方法形生长,细胞体积变大,胞浆丰富。但骨质疏松症
. 主要材料及仪器组胞浆内黑色颗粒较多,可见少量空泡核较大,偏于
—培养基,,胎牛血清,胰一侧,可有多个核仁,集落中心处见代谢产物堆积,
蛋白酶以上试剂购自公司;地塞米松,异丁后即可达%以上融合图。
基甲基黄嘌呤,胰岛素,吲哚美辛以上试剂购自
公司,淋巴细胞分离液上海试剂二厂,倒置
相差显微镜,细胞培养孵箱,
超净工作台,低温高速离心机,双
能线骨密度仪。
. 方法
.. 大鼠的分离和培养
月龄大鼠只,无菌操作下取出的大鼠
股骨,用含/青霉素、/链霉素
的’液漂洗,截除两侧骨骺端, 冲出
骨髓,贴壁缓慢加入含淋巴细胞分离液的离心管中,离
心后收取单个核细胞的界面层,重新加入—反
复洗涤次,用含%、/青霉素、图大鼠原代培养× 一
/链霉素、的—培养基悬浮接种于
。培养瓶中,置于、%、饱和湿度条件下。
常规培养。后更换新培养液,除去非粘附细胞。每
天观察记录细胞生长情况,隔日换液。待细胞达到%
以上融合时用.%胰酶消化,充分吹打后以×
/细胞数传入孔培养板,进行传代及诱导培养。传
代后将仍在原培养基中培养的细胞设为对照,每日取
孔,在倒置显微镜下用血细胞计数板计数每孔的细胞数
并求其均数,绘制细胞生长曲线。
.. 大鼠的诱导培养及表型鉴定
将接种于孔板的大鼠第代进行诱导
培养,成骨诱导组在含%的—培养基内加
入~/地塞米松,/左旋抗坏血酸, 图大鼠原代培养×
/维生素及/一磷酸甘油钠,成
脂诱导组则在含%的—培养基内加入.
/异丁基甲基黄嘌呤、/胰岛素、
/地塞米松、/吲哚美辛。各组
细胞培养至天后以值