文档介绍：第卷第期年月武警医学院学报
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论著
甲基化方法的优化
马勇,俞媛,王玮,陈立军
.武警医学院科研部,天津;.天津市天和医院检验科,天津;.武警医学院生化教研室,天
津
摘要:【目的】优化甲基化的反应体系及扩增参数,为基因甲基化的研究建立一个最佳的方法。
【方法】以一肝癌细胞株基因启动子区为模板,分析甲基化反应体系中、聚合酶
用量、加人时间、退火温度及循环方式对甲基化扩增的影响。【结果】反应体系:模板,
;正向引物, ;反向引物, ;,. ;/,. ;酶,. ;,
;,.。程序采用。【结论】优化了适用于基因甲基化的反应体系,为利
用甲基化分析方法研究肝癌等肿瘤发生机制奠定基础。
关键词:基因;甲基化;条件;优化
【文章编号】———【中图分类号】【文献标识码】

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甲基化是基因表遗传学的重要机制之一, 对修饰后的模板而设计的引物不可避免的含
许多研究表明其与人类胚胎的发育分化和肿瘤细胞有多聚和,所以相对于普通的来说,会出
的发生发展有关。目前有关甲基化的研究现较为明显的弥散带和引物二聚体。本研究以—
多为以下几种:限制性酶切、,针对甲
限制分析、亚硫酸氢盐一—、亚硫酸氢盐测基化检测方法的扩增体系和程序优化进行研
序法等,而上述几种研究方法均以模板究,以提高甲基化产物的纯度和扩增效率,
的亚硫酸氢盐修饰为前提进行扩增,针为肿瘤发生机制的研究奠定基础。
材料与方法
【收稿日期】——;【修回日期】——
【作者简介】马勇一,男,籍贯山东滨州,本科,讲师,研. 材料
究方向为肿瘤相关基因表达。.. 细胞:一肝癌细胞株购于复旦大
【通讯作者】陈立军一,女,籍贯天津宝坻,硕士,副教学医学院上海肝胆研究所,液氮保存。
授,研究方向为肿瘤相关基因表达。
武警医学院学报一第卷第期年月
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.. 试剂及仪器:细胞基因组提取试剂盒/ 以/电压电泳,在紫外凝胶成像系统下观
离心柱型天为时代公司;一修饰试剂:—察照相。
、氢醌、、鲑鱼精均购自公结果
司、异丙醇///无水乙醇国产分析. 浓度对甲基化扩增的影响
扩增产物电泳结果如图所示,当
纯;—纯化试剂盒—
,美国; 天为时浓度为./时效果最佳。
代,内含:聚合酶、、—
、反应缓冲液;扩增试剂盒上海生工公
司, 内含: ,、
、/、/、无
菌。
超低温冰箱日本公司、台式高速离
心机上海安亭科学仪器厂、仪美国.
公司、电泳仪北京六一仪器厂、
紫外透射仪美国公司、凝胶数字成像
系统美国公司。
. 方法
.. 基因组的提取及检测:采用细胞基因
组提取试剂盒提取一细胞基因组
,紫外分光光度计分析测定提取物的
值,计算的含量;/瑚,测纯度。
最后将样品稀释为/,用于反应条件的
优化实验。
.. 基因组的亚硫酸氢盐修饰及纯化:
,℃水浴—变
性;、.和. :热启动—;、:普通;:—
混合液中进行扩