文档介绍：南华大学
硕士学位论文
E2中抑瘤机制的初步研究
姓名:邱青朝
申请学位级别:硕士
专业:病理学与病理生理学
指导教师:贺修胜
20070501
原创性声明

本人声明,所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工
作及取得的研究成果。尽我所知,除了论文中特别加以标注和致谢的
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含为获得南华大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共
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作者签名: 日期: 年月日

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作者签名: 导师签名: 日期: 年月日
E2中抑瘤机制的初步研究
硕士研究生:邱青朝
指导教师:贺修胜教授
中文摘要
第一部分 Tet 调控 STGC3 E2 细胞系裸鼠成瘤性实验
目的:前期研究显示 STGC3 高表达,E2 细胞的生长,为进一步研
究 STGC3 基因的抑瘤作用,观测 STGC3 E2 裸鼠体内成瘤的
影响,并探讨其可能作用机制。
方法:采用 Tet/pTRE-E2 细胞系接种于裸鼠皮下,Dox 诱导 STGC3
基因高表达,观测 STGC3 E2 裸鼠体内成瘤的影响。运用
RT-PCR、免疫组织化学及蛋白质免疫印迹方法,分别从 mRNA 和蛋白质水平,
分析瘤组织中 STGC3 基因表达;采用 HE 染色观察瘤组织形态学改变;用流式
细胞仪,检测移植瘤组织中细胞的凋亡情况;用免疫组织化学方法,检测移植瘤
组织凋亡相关蛋白 Bcl-2 和 Bax 的表达。运用蛋白质组学相关技术,如二维电泳、
图像分析、质谱技术等方法,分析 STGC3 对移植瘤组织中蛋白质表达谱的影响,
筛选和鉴定与 STGC3 抑瘤作用相关的差异蛋白质。应用蛋白质免疫印迹验证热
休克蛋白 70 在裸鼠移植瘤组织中的表达情况。
结果:STGC3 蛋白质表达主要定位于细胞核内,Dox 诱导 STGC3 基因在
Tet/pTRE-E2 细胞系高表达后,Tet/pTRE-E2 细胞系裸鼠体
内成瘤受到明显抑制,与对照组比较,移植瘤成瘤时间晚、生长慢、肿块小、细
胞凋亡率高;Bcl-2 蛋白表达减弱,Bax 蛋白表达增强,差异有显著性意义
(P<);蛋白组学实验结果显示:STGC3 在移植瘤组织中高表达,肽酰辅氨酰
顺反式异构酶 A,丝切蛋白-1,抑制素和 G 蛋白表达上调,丝氨酸-苏氨酸蛋白
激酶 WNK1, 丝氨酸-苏氨酸二肽富含性剪切因子 1 和热休克蛋白 70 表达下
1
调。这些蛋白质涉及细胞骨架重构、细胞凋亡、细胞增殖、细胞免疫、分子伴侣
和信号转导等功能。应用蛋白质免疫印迹验证热休克蛋白 70 在裸鼠移植瘤组织
中的表达情况,结果与蛋白组学实验结果一致,说明蛋白组学结果较准确的反映
了裸鼠移植瘤组织中蛋白质的表达情况。
结论:
1 STGC3 高表达,使 Bcl-2/Bax 比值下降,E2 细胞凋亡,E2 裸
鼠移植瘤生长。
2 STGC3 高表达,移植瘤组织肽酰辅氨酰顺反式异构酶 A, 丝切蛋白-1,抑制
素和 G 蛋白等表达上调;丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶 WNK1, 丝氨酸-苏氨酸二
肽富含性剪切因子 1和热休克蛋白 70 等蛋白表达下调, CNE2 细胞的裸鼠成
瘤能力降低。
关键词:E2,Tet-on 调控系统,裸鼠,双向电泳,质谱
第二部分孕酮对 Tet 调控 STGC3 E2 细胞系生长增殖及蛋
白质表达谱的影响
目的:STGC3 E2 细胞的生长,另外,前期研究发现,种植
转染 STGC3 E2 细胞组的 4 只裸鼠中,2 只雌性鼠的荷瘤肿块明显小于
同组的 2 只雄性鼠,提示孕激素可能具有促进 STGC3 基因的抑瘤作用。本文旨
在进一步探讨孕酮在 STGC3 基因的抑瘤过程中发挥的作用。
方法: 采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)检测法,E2 细胞系及
Tet/pTRE-E2 细胞系生长增殖的影响。运用蛋白质组学相关技术,如
二维电泳、图像分析、质谱技术等方法,分析孕酮处理 Tet/pTRE-E2
细胞系的蛋白质表达谱改变。
结果:
① MTT 法检测结果显示,用 10-9mol/L-10-5 mol/L