文档介绍：学位申请人课题来源答辩委员会成员病理学与病理生理学樊英黄仲曦副教授陈系古教授钟雪云教授姚开泰教授肖广惠教授安靓教授论文评阅人晏光荣副教授马文丽教授年月业
物和戚致癌物因素与鼻咽癌的发生发展密切相关,在这些因素的共同作用下,正硕士研究生:樊英指导教师:黄仲曦副教授摘要鼻咽癌是一种上皮源性恶性肿瘤,绝大多数属于低分化鳞状细胞癌,恶性程度高,早期易发生淋巴结和全身远处转移,具有相当高的死亡率。鼻咽癌的地区分布极不均衡,在我国南方及东南亚一带发病率较高,其中又以广东省的发病率最高,故有“广东瘤”之称。目前认为遗传因素、感染、遗传易感性、饮食和某些环境化学促癌常鼻咽上皮细胞发生遗传和表观遗传学改变不断积累,最终引起细胞的恶性转化,导致鼻咽癌的发生。但姆⒉』粕胁磺宄肿瘤的发生发展是一个多因素参与、多基因改变、多步骤演进的复杂过程,受到体内、外各种因素的作用和影响,是许多肿瘤瘤基因激活或肿瘤抑制基因失活所致。瘤基因是由于存在正常细胞中的原瘤基因在某些致瘤因素作用下激活而成,瘤基因的活化是人类肿瘤发生发展的重要因素,瘤基因数量的增加或表达活性的增加或突变,均会导致肿瘤的发生。抑瘤基因是作用细胞增殖和分化的重要调控因子,在正常细胞中起阻滞细胞增殖,促进细胞分化的功能。抑瘤基因的缺失或突变失活可使瘤基因充分发挥作用也会导致恶性肿瘤的发生发展。在鼻咽癌的发生发展,瘤基因和抑瘤基因同样起关键作用。迄今为止,鼻咽癌抑瘤基因的研究,已有重大进展,、、等多个基因已在基因表达变化沉默后对细胞生物学行为的影响等方面被证实具有鼻咽癌抑瘤基因的潜质,而且发现其分子机制主要为基因的甲基化。但鼻咽
、、印、等基因由于在酒莺腿直茄拾┫赴,,和的表达芯片癌瘤基因的研究则相对滞后,虽然已有、、、鼻咽癌中的扩增或过表达而被推测为鼻咽癌潜在的瘤基因,但鲜有报道过表达后对细胞生物学行为的影响,更没有体内报道。因此,探索鼻咽癌瘤基因及其作用机制对于揭示鼻咽癌的发病机理就显得尤为重要。本实验组前期通过收集五个实验室发表的茄拾┍冉匣蜃樵咏莨菇ū茄拾┓⒉』频氖髂P汀Q芯拷峁崾玖霰茄拾┑闹要染色体变异事件,其中虻睦┰鍪潜茄拾┓⑸⒄沟脑缙谑录但是该区域仍然含有上百个基因。年等人结合酒捅泶谱芯片分析发现黑色素瘤瘤基因。我们先前采用同样的办法,整合分析本实验室已有的五种鼻咽癌细胞珻琀,蚇数据,结果发现了蚣壤┰鲇止泶锘騊。羌鬃旁腺激素受体家族成员,在恶性肿瘤的体液性高钙血症、乳腺癌和前列腺癌的骨转移中发挥作用,能促进结肠癌细胞的增殖、浸润、迁移及成瘤能力。因此,我们推测蚩赡茉诒茄拾┓⑸⒄怪衅鹬匾W饔谩基于前面工作的基础上,本课题的研究目的为采用整合分析方法,筛选鼻咽癌细胞株、、蜃橹械目赡芟喙氐牧龌蚣耙至龌颍对其进行初步的生物信息学研究。接着改变作为候选靶基因之一谋泶水平,观察其对鼻咽癌细胞株生物学行为的影响及可能的作用机制,为深入理解鼻咽癌发病的分子机制和寻找新的分子靶向治疗靶点奠定理论基础,为此本课题进行了如下研究:瘤基因及抑瘤基因筛选及初步生物信息学分析通过整合鼻咽癌细胞株酒荨⒈泶锲资菁耙知正常拷贝数变化数据,筛选鼻咽癌细胞中可能相关的瘤基因及抑瘤基因。得到隹赡芟喙氐陌谢颍渲屑壤┰鲇止泶镂个,既缺失又低表达为个。从龌虻敝兴婊槿个基因进行表达水平的检验,结中文摘要Ⅱ
,各种生物酶和激酶等,参与的通路主要包括贰⑾赴芷凇凋亡通路等。由于这些生物学功能涉及到了肿瘤发生发展及侵袭转移的多个阶段,因而瘤基因/抑瘤基因在鼻咽癌中的表达失调,可能通过调控下游一系列靶基因的表达进而引起鼻咽癌细胞多方面生物学特性的改变。随后我们利用砑直鸲匀榛赡芟喙氐牧龌颉可能相关的抑瘤基因和呋旌匣进行聚类分析和构建基因网络。结果三组基因都与瘤/抑瘤基因、⒈茄拾存在着密切关系。我们对其中与“瘤/抑瘤基因”的相关性进行,蔚乃婊D猓峁榛虻腜值分别为、和,证明我们筛选的基因确实为鼻咽癌的可能相关的瘤/抑瘤基因。乖げ釶可能通过影响鼻咽癌的异常生长。过表达员茄拾┑挠跋我们前期已证明潜茄拾┫。因此,本研究在鼻咽癌细胞株中过表达鄄炱对鼻咽癌细胞株生物学行为的影响,并预测可能与其共同作用的候选靶基因。┫赴曛蠵的表达水平与相比较,结果发现在虷中的表达水平均高于,而在中的表达水平最低。因此选作为过表达细胞珠。通过克隆重组菇《颈泶镌靥錺瓼疨,病毒包装后感染细胞,然后六孔板分选鉴定细胞,建立了稳定过表达的鼻咽癌细胞株/采用ḿ觳釶过表达后细胞的体外