文档介绍：广西师范大学
硕士学位论文
基因芯片技术分析IgA肾病发展相关的基因及功能初探
姓名:杨铭
申请学位级别:硕士
专业:野生动植物保护与利用
指导教师:邓业成;眭维国
20090401
基因芯片技术分析 IgA 肾病发展相关的基因及功能初探
作者:杨铭导师:邓业成(教授) 眭维国(主任医师) 戴勇(教授)
专业:野生动植物保护与利用年级:2006 级
摘要
肾病是原发性肾小球疾病中常见的病理类型,平均每年有%~%的病人发生终
末期肾衰,是终末期肾衰的主要原因之一。目前肾活检是唯一确诊依据免疫损伤造成的
形态学证据可以反映肾功能损害程度。或其循环免疫复合物在肾小球系膜区沉积引起
肾小球病理损害产生一系列临床症状。肾穿刺病理活检是目前诊断肾脏疾病最可靠的方
法。但肾穿刺活检术是一种创伤性检查,对于肾脏组织有一定的伤害,对病人也会带来一
定的痛苦和不便。
对肾病病机理的研究是肾小球疾病发病机理研究中最活跃、最丰富的领域之一。
但由于发病机制仍然不明迄今为止尚无特殊治疗药物。近年来大量研究表明,表观遗传
学变化与几类疾病的发病机制有关,主要包括癌症、免疫缺陷病及自身免疫性疾病。为了
研究肾病和表观遗传学上的关系,本实验采用采用染色质免疫沉淀联合芯片技术
—在全基因组范围内对肾病外周血的组蛋白赖氨酸进行高通量的检
测。随后采用染色质免疫沉淀—实时定量聚合酶联反应—验证芯片结果,定量
反转录聚合酶联反应—检测显著差异基因的表达水平。用统计软件进
行基因筛选。本研究将有助于进一步阐明肾病的病因学及发病机制,加深对这种疾病
病因的理解,有助于进一步探讨肾病治疗策略的潜在发展方向,为发展新的肾病
治疗方法可能提供一个非常重要的线索。因此,本研究具有重要的理论价值,实际价值和
临床应用价值。主要实验和结果如下:
、选用公司的检测细胞组蛋白甲基化的基因芯片(含有人
类个基因探针)对肾病患者外周血的组蛋白进行了高通量的检测分析。
将肾病活动期患者与健康者的组蛋白状态进行了比较,结果我们观察到个
探针有显著差异。其中个探针甲基化上调表达, 个探针甲基化下调表达。
、从表达量差异在倍以上的个基因中选取了个基因作为验证芯片结果的候
选基因。个基因分别是上调表达的基因:,;下调表达的基因: 。
通过染色质免疫共沉淀实时荧光定量聚合酶联反应,定量反转录聚合酶联反
应—检测显著差异基因的表达水平来验证芯片结果。结果显示:
,, 四个候选基因中变化趋势跟芯片结果一致。
、通过、, , 等网站对基因芯片数据进行大量
的生物信息学分析和文献调研,对候选基因、、、进行功能初
探。推测基因、、、对肾病有着一定的关系,有可能作为
肾病潜在的生物标记物和将来的治疗靶点。
II
4、虽然芯片结果提供了大量的候选基因,但是如何分析候选基因的功能成为研究基
因功能的主要瓶颈,对候选基因的功能分析将为人们了解前肾病发展的分子机理提供
可能。
关键词: 肾病;组蛋白赖氨酸;芯片;染色质免疫沉淀
III
Searching Differential Expression Gene in IgA nephropathy
Using Microarray and Analysis of Gene Function
Author:Yang Ming Tutor:Deng Yecheng Sui Weiguo DaiYong
Speciality: Wildlife Conservation And Utilization Grade:2006
Abstract
IgA nephropathy(IgAN) mon pathologic type of primary glomerular it is
the main season of 2%~3% patients turning to end stage renal biopay is the sole
evidence for its confirmed diagnosis,and the morphological changes resulting from immunulogic
injury may reflect the sverity of renal and its circul