文档介绍：内蒙古医学院
硕士学位论文
波形蛋白RNA干扰对人肝癌细胞系HepG2影响的研究
姓名:呼格吉乐
申请学位级别:硕士
专业:免疫学
指导教师:王文礼
20100501
中文摘要转染阴性质粒组的小饕籋细胞和未转染组的赴啾龋琍觥察赴纳に俾省⒌蛲鲆约扒窒R颇芰Φ谋浠教諺在肝癌细胞这些过杓圃蚝虶菘庵蠽的序列,构建鯲干扰婧侍宸ǚ直鸾鲜个扇表达载体。经鉴定证实,构建的序列与基因库中序列完全相同,并且未发现有对照载体的赴担直鹈狿删一一~一删一一组细胞的表达水平显著下降。并且通过—冉献H竞骎的表达量,〩,并且稳定转染人肝癌赴程中的作用,为肝癌发生、发展的研究及诊断与治疗提供有价值的资料。—猄籰一删一/猄—籰、一/猇——一/虎鯩——⒉庑蚣╫婧吮泶镌靥遄H镜紿细胞株,杀稻瘟霉素筛选阳性转染细胞克隆,制备稳定转染鯲干扰婧吮泶镌靥宓腍细胞系ü齦—冉献H竞的表达量,选出干扰效果最好的一个。觳飧扇判Ч詈玫奈榷ㄗH鞠赴系的细胞生长曲线、侵袭转移能力的改变。结果晒菇薞干扰婧突变、缺失、插入等异常存在。竦梦榷ㄗH个扇臨真核表达载体和阴性籋、删狧细胞。胍跣灾柿W橄赴涂瞻锥哉兆细胞相比,稳定转染橄赴纳に俾始趼蛲鲈黾樱窒胱R颇芰跞酢=,抑制赴脑鲋硂干扰擅飨栽黾親细胞的凋亡干扰擅飨越档虷细胞的侵袭转移的能力。关键词干扰ㄐ蔚鞍赘伟┣窒R。
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波形蛋白扇哦匀烁伟┫赴礖影响的研究胞内部结构的有序性方面起重要作用,而且还参与许多重要的生命活动Ⅲ】渲兄屑子,引起同源序列特异性的降解【俊K孀沤闞干扰的机制的阐明以及相关赴羌懿唤鲈谖窒赴翁惺芡饬Α⒈3窒介于肌动蛋白细肌丝和肌球蛋白粗肌丝之间,被命名为中间丝。中间丝对外力非常敏功能尚不清楚的成员之一。最早发现于鸡胚成纤维细胞,因免疫荧光细胞化学显示,波检索,其全长分化‘鲅9艿氖嬲與冽,白内障的发生和发展汹裙讨蟹⒒幼胖匾W饔谩肝癌琀且恢址⒉÷矢摺⒅瘟评选⑺劳雎矢叩亩裥灾瘤Ⅲ。我国肝癌的死亡率在所有恶性肿瘤中居第二位,每年死于肝癌的人数占全世界肝癌年死亡总数的%8伟┑姆⒉』浦两袢圆幻髁耍胰狈τ行У脑缙谡锒戏椒和治疗靶点扇,窒笫谴嬖谟谡婧松锾迥诘囊恢肿瓒贤庠椿因表达的自我防御体系。其基本原理是将双链—琩解为一个核苷酸组成的小的小干扰瑂魑=榈实验技术的改进,这项技术已被广泛的应用于肿瘤研究的众多领域:如扇旁谘芯肿瘤的多药耐药性‘,抑制肿瘤的侵袭浚瓒现琢鲎R啤骺刂琢鱿赴闹期‘,研究肿瘤细胞中的信号转导认喙氐闹琢鲅芯恐卸加泄惴旱挠τ谩细胞骨架是真核细胞中的蛋白质纤维网状支架系统,由微管、微丝和中间丝植煌嘈偷南宋槌伞丝琁窍赴羌苤薪峁购凸δ茏钗8丛拥囊蛔榈鞍字氏宋浚感,而且能在大的损伤力下够承受并且维持细胞形态,所以被称作是预防细胞拉伸的安全带汹】抑屑渌吭谙赴淖R疲赴姆至眩敌藕糯ǖ嫉确矫嬉灿任V匾猰比如在细胞转移、分裂时能够提供并增加多支管结构。波形蛋白琕且恢症笮椭屑渌肯宋鞍住縪属于中间丝蛋白中精确形蛋白从核膜呈放射性波浪状细丝通过细胞质连接到胞膜而得名。波形蛋白在进化上是很保守的汹】,从,开放性阅读框编码霭被岵谢S斜ǖ啦ㄐ蔚鞍自谌橄侔┰病⒏细胞肝癌‘⑶傲邢侔、胰腺癌‘岢Π等恶性肿瘤中均有表达。总之目前越来越多的证据显示波形蛋白在研究细胞粘附和移动、免疫移植反应、细胞凋亡、有丝分裂和。
—,‘一/猇—一琾舯一/猄—琾伽一/猇——及阴·。贾永喜等忉暾牟ㄐ蔚白基因开放性阅读框序列正向克隆到质粒载体中,再进行转染使得波形蛋白过表达,其期诊断及治疗提供实验依据。.籊疎—由美国公司合成。载体图谱、序列测定及构建方法癎特异性匕下游引物序列由大连公司合成内鐾直医堂筮亟±堑塞生堂焦途塞结果是重组波形蛋白的稳定表达细胞株的泶锼皆龈撸种屏巳橄侔┫赴鲋和侵袭能力等和贾永喜在研究上用了相同的方法,但却发现泶锼皆龈撸强了肝癌细胞侵袭能力。嚣瓤寺基因稳定转染前列腺癌细胞让其过表达并没有增强其体外侵袭能力。王文礼,刘婷等‘圳在研究周期蛋白干扰对赴赴鞍字首楸泶锏挠跋焓狈⑾郑盋的表达被干扰聊后,ひ种疲赴芷谧柚停辈槐泶锊ㄐ蔚鞍住L崾静ㄐ蔚鞍椎谋泶锟赡苡赴裥栽鲋秤泄亍5抢肦干扰技术研究波形蛋白对人肝癌胞影响的研究还未见到报道。为了进一步明确波形蛋白在⑸⒄怪械淖饔谩1臼笛椴捎梅肿涌寺〖际构建人扇臨真核表达载体,转染肝细胞癌赴⑸秆∥榷ū泶锵