文档介绍：实验一蛋白质含量测定方法的研究一、研究背景蛋白质是生物的重要组成部分, 在人类发现蛋白质后一直没有停下过研究得脚步。在实验室提取蛋白质的过程中, 目标蛋白质的来源是广泛的, 而不同的样品中目标蛋白质的含量是不同的, 为了得到更多的目标蛋白, 就需要了解样品中蛋白质的含量。在实际的生活中也需要运用蛋白质含量的测定, 例如牛奶、奶粉中蛋白质含量。记得前几年轰动一时三聚******事件, 国家的标准蛋白质检测方法被不法分子所利用, 通过蛋白质检测方法的缺陷来谋取暴利。目前常用的蛋白质检测方法有五种: 凯式定氮法、 Folin- 酚法、考马斯亮蓝法、紫外法、双缩脲法。不同的方法有不同的优缺点。二、研究目标通过四种不同的蛋白质测定方法了解各种方法的优缺点。在不同的条件下, 能选择正确的测定方法,从而获得正确的数据。三、研究策略根据资料可以知道四种方法的局限性, 针对这一个单一的变量设计五组实验。一个是标准对照组,其他四组分别在标准组的基础上引入一种变量。用四种方法分别测定五种溶液。在对同一种溶液的测定结果中, 必有一种方法的结果和其他的结果有显著差异, 同时与标准液的结果也有显著的差异。我们就认为这组溶液中的变量对于该蛋白质测定的方法影响较大。四、研究方案及可行性分析研究方案: 1 、配置一组浓度梯度的标准液,分别用四种方法测定,并建立标准曲线。 2、配置五种等浓度的样品蛋白质溶液并编号 ABCDE 。在配置过程中,A 组加 10 毫升蒸馏水; B 组加 10 毫升嘌呤溶液; C 组加入 10 毫升 EDTA 溶液; D 组加入 10 毫升双氧水溶液; E组加入 10 毫升盐酸溶液。 3 、分别用四种方法测定五种蛋白质溶液。 4 、分析结果可行性分析: 更具已有资料设计了四个单一的变量, 分别针对四种实验的缺点, 同时保证没有其他的变量。预期结果: 在每组实验的结果中分别有一个数据是在横向和纵向上都有显著差异的。我们可以确定这个变量对该实验有很大的影响。五、具体实验设计 1. 建立标准曲线紫外法 a. 仪器:紫外分光光度仪、移液管、试管和试管架试剂:标准牛血清蛋白溶液 b. 主要步骤试管号 12345678 标准蛋白质液 dH 2O (ml) 蛋白质浓度(mg/ml) OD 280040 0 按照上表分别向没知识观众加入各种试剂,混匀。选用光程为 1cm 的石英比色杯, 在 280nm 下测其光密度值。以 OD 值为纵坐标,绘制标准曲线。双缩脲法 a. 仪器:分光光度计,分析天平,振荡机刻度吸管,具塞三角瓶,漏斗试剂:双缩脲试剂, 的 NaOH ,标准酪蛋白溶液配制成 5mg/ml 的溶液 b. 主要步骤试剂管号 123456 标准酪蛋白溶液(ml) 0 d H2O(ml) 1 双缩脲试剂(ml) 444444 蛋白质含量(mg/ml) 012345 震荡 15min , 室温静置 30min , 540nm 比色, 以蛋白含量(mg/ml) 为横坐标, 吸光度为纵坐标,绘制标准曲线。 Folin-