文档介绍：PCR扩增中的有关问题一、概念PCR扩增:聚合酶链反应,在体外酶促扩增和分离目的基因片段的技术。(在体外合成DNA)。二、PCR扩增过程变性→复性(退火)→延伸(90—95°C)(55—60°C)(70—75°C)如此循环,每循环一次,DNA就扩增2倍,在2---3小时就可以达到几十万----上百万倍!!PCR扩增目的基因的图解过程:高温变性(解旋为单链)低温退火(引物与单链互补结合)适温延伸(在Taq酶的作用下合成与模板互补的DNA双链)重复循环三、有关问题1、PCR扩增原理是什么?DNA的复制。2、PCR扩增引物是什么?在DNA扩增时引物是DNA。(但DNA复制时候的引物却是RNA。)(引物不是RNA,而是人工合成的单链DNA,其长度通常为20-30个脱氧核苷酸)3、PCR扩增场所是什么?细胞外。有关问题4、PCR扩增原料是什么?已知基因的核苷酸序列、四种脱氧核苷酸、引物、TaqDNA聚合酶。5、PCR扩增条件是什么?已知基因的核苷酸序列、四种脱氧核苷酸、引物、TaqDNA聚合酶,适宜的温度和PH值。6、引物与单链结合遵循什么原则?碱基互补配对原则。有关问题7、PCR扩增的前提是什么?要有一段已知的目的基因核苷酸序列8、PCR扩增引物要多少种?2种。9、引物之间或者同一引物的碱基对之间可以配对吗?不能。有关问题10、PCR扩增过程中,DNA聚合酶从哪一端开始聚合(复制)?按3’→5’方向复制出互补DNA,即引物的延伸阶段。(3’端上有—OH,5’端上有—P)11、PCR反应体系有哪些组分组成?DNA模板、反应缓冲液、dNTP、两个合成的DNA引物、耐热Tag聚合酶。12、引物的合成需要的原料?酶、脱氧核苷酸、能量。有关问题13、镁离子对扩增效果有什么影响?镁离子低浓度可以减少产量,高浓度可以降低DNA扩增的特异性。应注意Mg2+的浓度要合理。14、引物中的G+C比例会影响DNA扩增的效果吗?会的。应在G+C=60%为好。太少,DNA扩增的效果差;太多,易出现非特异性条带。有关问题15、dCTP、dATP、dGTP、dTTP中文名称分别是什么?三磷酸胞苷脱氧核苷酸。。。(这4种脱氧核苷三磷酸是DNA合成的基本原料。)16、PCR扩增的优点?灵敏度高、特异性强,快捷,简便,重复性好,易自动化,对样品要求低等优点。17、解旋(变性)过程中需要解旋酶吗?不需要。有关问题18、PCR扩增n次后形成为2n个DN***段。19、应用PCR方法可以检测RNA病毒吗?可以检测RNA病毒。但是首先应将RNA转化成cDNA才能进行扩增。(如何转化?变性)20、PCR扩增要注意出现:假阴性、假阳性。PCR反应的各温度点的设置要合理。21、PCR扩增体系中要加入4种脱氧核苷酸混合物。