文档介绍：山东大学
硕士学位论文
CD70在肝癌中的表达及其对淋巴细胞增殖抑制作用的研究
姓名:吴晗
申请学位级别:硕士
专业:医学免疫学
指导教师:曹英林;石永玉
20080512
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期:型啤卵多/论文作者签名:塑叠罢旦茬期:丝复芸旦应型。复关于学位论文使用授权的声明原创性声明校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版,允许论C苈畚脑诮饷芎笥ψ袷卮斯娑本人郑重声明:所呈交的学位论文,是本人在导师的指导下,独立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外,本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体,均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。论文作者签名:期:本人完全了解山东大学有关保留、使用学位论文的规定,同意学文被查阅和借阅;本人授权山东大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索,可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。导师签名:日
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在肝癌中的表达及其对淋巴细胞增殖抑制作用的初步研究中文摘要探讨基因在肝癌中的表达,著对其在肝癌免疫逃逸中的作用进行初步探讨,为阐明肝癌的免疫逃逸机制奠定基础,为寻找肝癌免疫治疗的新靶点提供理论依据。研究方法:一。在肝癌中的表达及其克隆表达甊觳釩脑诟伟┍瓯竞透伟┫赴抵械谋泶设计合成针对基因的特异性引物,收集翳癌组织、癌旁组织和肝癌细胞系、一细胞,利用试剂抽提细胞总检测的表达。婧吮泶镌靥錚的构建设计合成针对基因编码区酶物寄列:上游雩锇琀酶切位点,下游引物包含盖形坏悖訠D0澹琍扩增人基因。锞璈、盖校厥蘸罂寺∪隤载体。连接产物转化大肠杆菌琇桨迳秆⊙粜灾刈樽樱⒕盖小、庑分析鉴定。弑泶镎婧吮泶镌靥錚墓菇设计合成针对基因编码区的镄蛄校荷嫌吻質物包含酶切位点,下游引物包含酶切位点,以为模板,┰鋈薈因。锞璑盖校厥蘸罂寺∪隤载体。连接产物转化大肠杆菌琇桨迳秆⊙粜约遄樽樱⒕盖小、庑蚍治黾ā方法检测蛋自表达水平一、分别转染肝癌细胞系后利用试目的:甊蚖山东大学硕士学位论文
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剂抽提细胞总腿,经检测的表达,提取总蛋宣,分析蛋白表达情况。、转染蒡于癌细胞系珏鄙杩试剂,鐾℃、,酶标仪上测值,计算甊觳馊鐁赴罨昂驝谋泶锴榭设计合成针对、基因的特异性引物,分别收集活化前后在脬癌中的表达及其克隆表达王垢伟┳橹例基因表达呈阳性,┡宰橹疌虮泶锞呈阴性。肝癌细胞系,蠧虮泶锍恃粜裕琀细胞中基因表达呈阴性。晒菇ㄕ婧吮泶镌靥錚阳性重组予质粒抽提后分别进行连接后单、双酶切、测序分析鉴弑泶镎婧吮泶镌靥錚墓菇方法检测蛋白表达水平重组予籆—转染赴玻琑狿和分别检测到在偷鞍字仕缴嫌斜泶铮⑶腋弑泶镌靥的表达率较一明显升高。,转染后的隞才嘌螅琂鲋骋种瓹椒ḿ觳釩曰罨疛鲋车挠跋载体和空细胞对照H后,与活化共培养螅尤隒增殖抑制率。细胞总璕觳釩谋泶锴榭觥结果:┍瓯竞透伟┫赴抵械谋泶定,证明重组载体菇ǔ晒Α甊蚖伟┫赴抵蠧上灾种苹罨疛赴脑鲋山东大学硕士学位论文
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率与空细胞对照组和空载体对照组相比显著舞高。甁赴罨驝膍泶锼矫飨陨结果显示,活化后细胞、的水平较活化前明结论及意义:本研究首次采用检测了肝癌细胞系和肝癌标本中的表达情况。结果显示肝癌细胞系,蠧泶锬粜裕琀细脆中表达呈阴性。例肝癌组织中鼵泶锍恃粜裕例癌旁组织表达均呈阴性。本研究首次构建了真核表达载体⒐菇吮泶锫式细的高表达真核表达载体糕一⒓觳獾狡湓赗和蛋自水平均有表达。转染肝癌细胞系赴ü冉献H厩昂蟮母伟┫赴曰罨腏胞增殖的影响,发现转染基因后的肝癌细胞明显抑制了细胞的增殖。有研究指出梢鸹罨馨拖赴牡蛲觥蚮~样同属于肿瘤坏死因子受体超家族的成员,但与芴宀煌珻陌睬敝グ浆死亡结构域。转导凋亡信号需要借助一种凋亡前体蛋白,。蛋白含有一个类似胞浆死亡结构域的区域,与的胞浆尾区结合传导凋亡信号。本研究采用碳赴蛊浠罨直鸺觳獯碳で昂驤赴鸆的表达,发现刺激盾细胞、的表达水平明显升高。由此可见,被