文档介绍：考马斯亮蓝G-250法测定蛋白质含量
专业班级：制药工程 3班小组组员：李梦娴李敏林晓丝
试验目标
1、了解考马斯亮蓝法测定蛋白质原理
2、掌握考马斯亮蓝法测定蛋白质含量操作步骤
试验原理
1、依据蛋白质理化性质，有多个蛋白质定量方法。考马斯亮蓝G-250是比色法和色素法相结合复合方法。考马斯亮蓝G-250是一个染料，在游离状态下呈棕红色，当和蛋白质结合后呈青蓝色。在一定范围内，也就是蛋白质含量在0~1000ug范围内，蛋白质-色素结合物在595nm下吸光度和蛋白质含量成正比，所以可用比色法测定。
2、考马斯亮蓝G-250法有常量法和微量法两种。
仪器和试剂
1、仪器：分析天平；铁架台；大漏斗；洗瓶；烧杯100ml×2、50ml×1；吸管10ml×2、5ml×1；胶头滴管；移液枪；离心管10个；722型分光光度计；容量瓶100ml×3；洗耳球×2；玻璃棒；记号笔。
2、试剂：
（1）蒸馏水。
（2）标准蛋白质溶液：用移液枪吸收1ml浓度为1mg/ml标准蛋白质溶液，溶于蒸馏水并定容至10ml，。
（3）考马斯亮蓝G-250(%)染液:-250,溶于5ml 90%乙醇中，加入85%（m/v)磷酸10ml,最终用蒸馏水定容至
100ml（此溶液不宜久存，在常温中可放置1~2个月）；将定容好染液过滤并装入棕色瓶中保留。
（4）样品液：用移液枪取1ml纯牛奶液体（经调查，~），用蒸馏水稍做稀释，然后转移至一号100ml容量瓶中并定容至100ml;用10ml吸量管吸收10ml一号容量瓶中液体于二号100ml容量瓶中，最终用蒸馏水定容至100ml，此时二号容量瓶中为待测样品液。
操作步骤
1、0~100μg/ml标准曲线制作：
取8支离心管，编号后，按下表加入试剂，盖塞后，将各试管中溶液纵向倒转混匀，室温静止5min后，以管一为空白对照，在595nm 下比色测定。以标准蛋白质含量（μg）为横坐标，吸光度为纵坐标，绘出标准曲线。
管号
1
2
3
4
5
6
7
8
蛋白质标准液（ml）
0

蒸馏水（ml）

0
考马斯亮蓝染液
5
5
5
5
5
5
5
5
蛋白质含量（μg）
0
10
20
30
40
60
80
100
A595
0

2、样品中蛋白质含量测定
另取两支洁净试管（做一反复），标号A、B。分别加入1ml待测样品液体和5ml考马斯亮蓝染液，将两支试管中溶液纵向倒转混匀，室温静止5min后，测定方法同上，由样品液吸光度查标准曲线即可求出含量。
标号
A
B
待测样品液体(ml)
1
1
考马斯亮蓝染液(ml)
5
5
A595