文档介绍：大鼠结肠上皮细胞培养
实验试剂、
1． DMEM完全培养基：
DMEM高糖培养基、Hepes 20 mmoL/L，胰岛素 200 U/L，肝素钠 100mg/L、FBS 25 mL/L 、EGF 10 ng/mL、牛垂体提取物5 mg/L 、青霉素10 000单位/mL、链霉素100 μg/mL、庆大霉素100 μg/mL、两性霉素B 3 μg/mL
2．含抗生素的D-Hanks液：青霉素10 000单位/mL、链霉素100 μg/mL、庆大霉素100 μg/mL、两性霉素B 3 μg/mL 、D-Hanks、
3． g/L，溶于D-Hanks缓冲液中
4． Hanks液、（HBSS）
5．透明质酸酶溶于Hepes缓冲液中
6．10 mM DTT、1mM EDTA，用Hanks配制
三、实验用具：
离心机（eppdorf 5810R）、超净工作台（博讯）、包被好的6孔板、弯头剪刀、弯头镊子、50 ml离心管、200目网筛、三角瓶、细菌培养皿、解剖皿（板）、
四、实验步骤
1 吸取适量100 ug/ml的多聚赖氨酸，以铺满培养皿底为宜。37℃包被4h，回收包被液，自然晾干培养皿备用。
处死前72h，用10 mg/ml的新霉素饲养大鼠，处死前48h禁食自由进新霉素水，处死前24h禁食禁水。
水合氯醛麻醉大鼠，无菌打开腹腔，取出结肠，剔除表面的结缔组织，将结肠置于预先装有含抗生素的D-Hanks液的细菌皿中纵向剖开结肠，用含抗生素的D-Hanks液冲洗干净，去除积粪等东西。
将纵向剖开的结肠剪碎成1mm3的组织块，用含抗生素的D-Hanks液冲洗2-3次。
将组织小块转移到50 ml离心管中，加含10 mM DTT和1mM EDTA的Hanks 液至20 ml，室温下放置15 min，4°C，300 g 离心 5 min。
把沉淀转移到100mL三角烧瓶中，加入透明质酸酶液约50 mL，37°C震荡（每分钟80圈），消化，可见消化液变浑浊，4°C，100g离心5 min
将沉淀转入装有20 mL I型胶原酶的三角瓶中，37 °C震荡（每分钟80圈）30 min，4°C，200g离心5 min.
用冰预冷的Hanks液10mL将沉淀反复吹打5min，用200目网筛过