文档介绍：南方医科大学
硕士学位论文
携带人内皮抑素基因腺病毒质粒的构建及相关功能的研究
姓名:袁瑷芹
申请学位级别:硕士
专业:妇产科学
指导教师:何援利
20070520
携带人内皮抑素基因腺病毒质粒的构建及相关功能的研究硕士研究生:袁瑗芹指导教师:何援利教授摘要研究背景子宫内膜异位症,简称内异症或是一种雌激素依赖性疾病,其真正的病因和发病机制还不明确。目前临床上治疗的主要目标只局限于减轻疼痛,提高妊娠率以及尽可能的延迟疾病复发,尚不存在针对病因治疗的药物,疾病也无法得到根治。腹腔镜手术治疗内异症,是目前外科治疗的方法之一,但在轻中度病变、不孕和复发患者中手术的价值还存在争议。在内异症发病机制的研究中,目前普遍接受的观点是年忍岢龅摹爸种学说”,指出异位灶必须在新生血管的支持下才能维持内膜的生存和发展。,它能特异地抑制血管内皮细胞增殖,这预示着其在内异症治疗中具有的巨大潜力。目前对于内皮搠素用于抗肿瘤血管生成的研究备受关注,且其蛋白治疗在国外已进入到期临床试验阶段,但由于内皮抑素蛋白质结构不稳定,半衰期短,需多次重复给药,且其生产工艺复杂,这些都大大限制了其应用。如果能采取基因治疗的策略,使机体本身变成一个生产内皮抑素蛋白的“工厂”,就可能彻底解决上述问题。腺病毒载体的应用为内皮抑素实现基因治疗提供了一个很好的途径,被广泛地应用于体外基因转导、体内接种疫苗和基因治疗等各个领域。硕士学位论文
目的方法与结果结论为深入研究内皮抑素在子宫内膜异位症治疗中的疗效,我们拟构建包含人内皮抑素虻娜毕菪拖俨《局柿#孟嘤Φ陌跋赴担备具有感染能力的腺病毒颗粒,去感染与血管生成密切相关的血管内皮细胞,观察对内皮细胞的影响,验证并探讨其功能和作用机制,为进一步研究内皮抑素在子宫内膜异位症动物模型上的治疗作用打下基础。没蚬こ谭椒ɑ竦萌四谄ひ炙鼗颍杓铺囟ㄏ拗菩悦盖形坏悖皮抑素基因插入缺陷型腺病毒载体中。构建的重组质粒经测序验证,所获得目的基因序列与已发表的人内皮抑素基因序列相比,第话被岜嗦爰罨蒅突变为ū嗦氲陌被岫际蔷ò彼幔隚中人内皮抑素蛋白质序列完全一致,属于沉默突变型,不影响后续表达。刈橄俨《局柿O咝曰笸ü齃转染赴得到包含人内皮抑素基因的完整腺病毒颗粒,通过氯化铯密度梯度离心法加以纯化后,用ú舛ㄆ洳《ê玫闹刈槿四谄ひ炙叵俨《続腥綞脐静脉内皮细胞,.测定鞍椎谋泶锴榭觯魇较赴跫觳釧引起赴蛲龅那榭觯嬷艫腥竞蟮腅细胞生长曲线。与对照组相比,病毒感染小时后检测到明显的鞍妆泶铮式细胞术证实在感染后出现赴蛲觯赴で呒测显示赴贏腥竞笊な艿矫飨韵拗啤通过构建包含人内皮抑素基因的缺陷型腺病毒质粒,利用相应的包装细胞系,制备具有感染能力的腺病毒,感染的中文摘要
脐静脉内皮细胞能有效表达琱能诱导细胞发生细胞凋亡现象,明显抑制其生长增殖。该研究将为进一步探讨含人内皮抑素腺病毒在子宫内膜异位症动物模型中的治疗作用奠定基础。硕士擘位论文关键词子宫内膜异位症人内皮抑素腺病毒重组质粒功能研究
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导师签名:何援利龟高吲同期:年⒈C,:所呈交的论文是本人在导师的指导下独立进行研究所取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容外,本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写的成果作品。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体,均已在文中以明确方式标明。除与外单位合作项目将予以明确方式规定外,本研究已发表与未发表成果的知识产权均归属南方医科大学。本人承诺承担本声明的法律效果。作者签名:袁瑷芹本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定,同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版,允许论文被查阅和借阅。本人授权第一军医大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索,可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。本学位论文属于朐谝韵孪嘤Ψ娇蚰诖颉按纭:⒉槐C堋獭硕士学位论文日期:年袁瑗芹闩期:年H
前言子宫内膜异位症以下简称内异症或是一种妇科常见病,发病率逐年增长,大约%的育龄妇女,%~%的不孕妇女患有该病。主要引起不孕、痛经、性交痛及慢性盆腔痛等症状【壳爸饕2捎眉に乩嘁┪和外科手术这两种治疗方法,虽对缓解症状,提高妊娠率有一定帮助,但效果有限,且存在一定的副作用,短时间内容易复发,故虽属良性疾病,却严重影响妇女的身体健康、生活质量和家庭稳定。目前应用的药物主要