文档介绍：喙氐膍纳秆〖捌涔δ艿某醪窖芯课题来源:自选学位申请人放射医学郭玲教丁振华教授答辩委员会主席答辩委员会成员李雪谦论文评阅人王小菁梅曼形专称指导师陈晓光邹剑明杨宇华冯瑞林黄耀熊年南方医科大学级博士学位论文业名一●
\喙氐膍纳秆〖捌涔δ的初步研究博士研究生:郭玲指导老师:丁振华摘要近年来,一类叫做姆潜嗦胄分子,在监控个体发育时相转变、调控特定细胞增殖、分化进程等方面起着重要作用。其在紫外线的致损伤和致病机制中的作用,逐渐被科学家们发现。通过高通量筛选的技术平台获得喙氐膍茄芯縐敏感的起点。因此,本课题采用基因芯片筛选喙豰镄畔⒀分析及验证其作用靶点,并探讨其在表皮癌中的作用,研究结果为探明调控造紫外线的致损伤的分子机制、探索诒砥ぐ┲凶饔锰峁├砺壑傅和实验依据。研究目的:应用芯片筛选丈涞腘赴泶飉并寻找差异表达调控的靶基因,为进一步研究在盏嫉信号传导通路中的作用打下基础;对生物学预测的靶基因//进行实验验证,先从结构学方面来验证痬南嗷作用,为从功能学方面研究它们之间的关系做好了准备;⑻┲涞牧O担=。方法:ā⒘
靶基因预测软件预测差异表达可能调控的靶基因,并利用数据库将预测的靶基因进行了分析。利用在线数据库等预测的靶基因,⒂瓹ü獗泶锉ǜ嬖靥逖橹猰的直接靶基因。采用荧光定量的方法鉴定了谄し袅弁碅淼谋达特性,用H酒し袅弁聪赴旰螅徊讲捎肨小室检测抑制后细胞体外运动能力的改变,采用小室检测抑制后细胞体外侵袭能力的改变,平板克隆形成实验和流式细胞术检测细胞增结果:峁琋赴谑艿讲煌亮康腢照射后,痬渖媛饰プ笥遥偌绦哟骍的剂量,其生存率明显下降,故痬腢是我们实验所选取的合适剂量。接受痬螅绦养不同的时间点,发现细胞在照射后的,,和渖媛时化显著,故我们选择这些时间点进行后面的芯片分析。流式细胞仪分析显示:细胞在痬丈浜蟮,期细胞群的比例明显提高,而且出现了一个明显的凋亡峰和期细胞阻滞。细胞经痬照射后继续培养杉缙诘蛲鱿赴硐治O赴宋狝旧ǔ驶坡躺光,浓聚成颗粒状;在细胞的一侧,可见细胞出芽。芯片结果显示,实验组细胞与对照组细胞差异表达的个,其中个表达上调,,..,甿.,。信号通路分析发现,。、
利用等多个靶基因的预测软件对的靶基因进行预测,结合分析,最后我们确定对、和这三个靶基因进行实验验证。┙峁说明,是在靶基因的蛋白水平发挥作用,而不影响靶基因的转录。,用H竞盇赴珼蠹觳庥ü獾鞍酌的活性,结果显示,相对于对照组,转染组的荧光素酶的表达量具有显著差异。这提示了是通过其的疷发挥作用,且是其直接的靶基因。=侵市纬上赴叮桨蹇隆形成实验结果显示,与窄白对照组和错义转染组比较,.,,反义片段组细胞穿过聚反义片段组细胞细胞的侵袭能力显著降低.。结论:我们的研究揭示了浜蚼牧O担罢页隽嗽谔囟ㄌ件下对舾械膍馕Q芯渴躑调节的泶锾峁┝嘶的依据。我们进一步证明了是的靶基因,在蛋白水平抑制的表达,而不影响其转录,它们之间是通过疷相互作用的。在表皮痛细胞弑泶铮湟种坪笙灾档土似し袅弁聪胞的体外迁移和侵袭能力,为研究在皮肤痛巾的功能打了一定的基础。博士学位论文碳酸酯膜的细胞数减少,差异具有显著性.。小室结果显示,关键词:
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