文档介绍：本文由: 华夏学术传媒网提供要:本文根据各化学发光免疫分析方法所使用标记物质的不同,将化学发光免疫分析方法分为化学发光免疫分析、化学发光酶免疫分析和电化学发光免疫分析法, 并对各方法经典标记物质及分析方法原理进行了分析。同时,介绍了化学发光免疫分析方法在医学检验、食品安全及环境科学方面的应用进展情况。关键词:化学发光免疫分析;分类;研究进展化学发光是在常温下由化学反应产生的光的发射。其发光机理是: 反应体系中的某些物质分子, 如反应物、中间体或者荧光物质吸收了反应释放的能量而由基态跃迁到激发态, 当中间体由激发态回到基态时会释放等能级的光子,对光子进行测定而实现定量分析[ 1 ]。化学发光免疫分析方法是将化学发光与免疫反应相结合的产物, 因化学发光具有荧光的特异性,但与荧光产生需要激发光不同,化学发光由化学反应产生光强度,并不需要激发光,从而避免了荧光分析中激发光杂散光的影响。化学发光免疫分析包含了免疫化学反应和化学发光反应两个部分。免疫分析系统是将化学发光物质或酶标记在抗原或抗体上, 经过抗原与抗体特异性反应形成抗原-抗体免疫复合物。化学发光分析系统是在免疫反应结束后, 加入氧化剂或酶的发光底物,化学发光物质经氧化剂的氧化后,形成一个处于激发态的中间体,会发射光子释放能量以回到稳定的基态, 发光强度可以利用发光信号测量仪器进行检测。待测物质浓度因为与发光强度成一定的关系而实现检测目的[ 2 ]。一、化学发光免疫分析方法的类别化学发光免疫分析法根据标记物的不同可分为 3 大类, 即化学发光免疫分析、化学发光酶免疫分析和电化学发光免疫分析法。(一) 化学发光免疫分析化学发光免疫分析是用化学发光剂直接标记抗体或抗原的一类免疫测定方法。目前常见的标记物主要为鲁米诺类和吖啶酯类化学发光剂。 1. 鲁米诺类标记的化学发光免疫分析。鲁米诺类物质的发光为氧化反应发光。在碱性溶液中, 鲁米诺可被许多氧化剂氧化发光, 其中 H2O2 最为常用。因发光反应速度较慢, 需添加某些酶类或无机催化剂。酶类主要是辣根过氧化物酶( HRP ), 无机类包括 O3 、卤素及 Fe3+ 、 Cu2+ 、 Co2+ 和它们的配合物。鲁米诺在碱性溶液下可在催化剂作用下,被 H2O2 等氧化剂氧化成 3 -氨基邻苯二酸的激发态中间体, 当其回到基态时发出光子。鲁米诺的发光光子产率约为 ,最大发射波长为 425 nm 。 2. 吖啶酯类标记的化学发光免疫分析吖啶酯用于化学发光免疫分析方法( ChemiluminescentImmunoassay , CLIA )由于热稳定性不是很好, Klee 等研究合成了更稳定的吖啶酯衍生物。在含有 H2O2 的碱性条件下, 吖啶酯类化合物能生成一个有张力的不稳定的二氧乙烷,此二氧乙烷分解为 CO2 和电子激发态的 N -***吖啶***, 当其回到基态时发出一最大波长为 430 nm 的光子。吖啶酯类化合物量子产率很高,可达。吖啶酯作为标记物用于免疫分析,发光体系简单、快速,不需要加入催化剂, 且标记效率高, 本底低。吖啶酯或吖啶磺酰***类化合物应用于 CLIA , 通常采用 HNO3+H2O2 和 NaOH 作为发光启动试剂, 有些在发光启动试剂中加入 Triton X - 100 , CTAC , Tween - 20 等表面活性剂以