文档介绍：广州医学院
硕士学位论文
细胞内ATP浓度决定蛋白酶体抑制诱导细胞死亡的敏感性
姓名:张小燕
申请学位级别:硕士
专业:病理学与病理生理学
指导教师:刘金保;董伟华
20090601
细胞内ǘ染龆蛋白酶体抑制诱导细胞死亡的敏感性中文摘要背景与目的方法与结果确绞浇械骺亍G捌谑笛橹っ飨赴贏浓度的调控是可行的。赴贏浓度决定蛋白酶体抑制诱导细胞死亡敏感性的研究右旋葡萄糖是细胞内闹饕@丛次镏剩E嘌钠咸烟鞘怯倚咸烟牵硕士研究生:张小燕导师:刘金保教授董伟华教授泛素一蛋白酶体系统—琔ü榈枷赴诙嘀蛋白的降解而参与细胞生命过程的调节。蛋白酶体是肿瘤治疗的重要靶点,蛋白酶体抑制诱导的细胞死亡具有敏感性差异。本课题组在前期实验中首次发现ǘ对鞍酌柑寤钚跃哂兴虻骺刈饔茫⑹状蛋白酶体活性ǘ饶J酵肌悄谠葱孕》肿樱锊煌橹腁浓度不一样,推测蛋白酶体抑制诱导的细胞死亡敏感性受细胞内ǘ鹊骺亍1疚闹荚谥っ飨赴贏浓度决定蛋白酶体抑制诱导细胞死亡的敏感性,为细胞内ǘ鹊骺氐鞍酌柑骞δ芴峁┮谰荨赴贏浓度的调控选用前期实验己明确产能途径的细胞蕴墙徒馕V鳎堑挠醒跹趸8和细胞蕴堑挠醒跹趸季杂攀为研究对象。通过干预细胞培养基的葡萄糖含量、使用腺苷供能,、抑制细胞的产能途径【氧化磷酸化抑制剂寡霉素,
①不同浓度的分别在右糖培养基与无糖②细胞内ǘ雀呤钡鞍酌柑逵盏嫉南赴劳鲅现亍胞内ǘ雀呤钡鞍酌柑逡种朴盏嫉南赴劳鲅现亍①实验同时采用无糖培养基与右糖培养基,分对照组,椋琈组,椋┪镒饔∈保魇较赴跫觳庀允荆姨桥嘌赴劳雎%~培养细胞时细胞内ǘ雀撸褂梦尢桥嘌毕赴贏浓度低。和培养基的细胞作用不同时间,流式细胞术检测显示隡在右糖培养基诱导的细胞死亡比无糖培养基细胞严重,并呈剂量依赖关系,饔∈毕赴劳雎氏嗖%,饔∈∈彼劳雎氏嗖%直鹱饔糜谟姨桥嘌胛尢桥嘌赴τ糜ü獾怪孟晕⒕进行细胞形态学改变动态观察嗖領,时程小时。右糖培养基细胞“出芽”、凋亡小体形成、细胞破裂等细胞死亡形态学改变明显,无糖培养基细胞胞膜基本完整结果说明细胞内ǘ榷缘鞍酌柑逡种萍劣盏嫉南赴劳雒舾行源嬖谟跋欤右糖培养基与左糖培养基对蛋白酶体抑制诱导细胞死亡敏感性的影响左旋葡萄糖是右旋葡萄糖的对映异构体,不能代谢供能,用于平衡细胞渗透压。分别在右糖培养基与左糖培养基细胞作用时、小时,流式细胞术检测显示隡在右糖培养基诱导的细胞死亡比左糖培养基严重,药物作用∈毕赴劳雎氏嗖钤%,药物作用小时细胞死亡率相差约%,两药物各自在右糖培养基与无糖培养基的细胞死亡率比较,具有统计学意差义,分别在右糖培养基与左糖培养基细胞作用小时,电子透射显微镜细胞超微结构图像显示右糖培养基细胞死亡改变明显:核浓缩,染色质呈新月状、团块状聚集在核膜周围或核碎裂,胞浆空泡化,细胞膜破裂;左糖培养基细胞死亡改变表现为线粒体肿胀,凋亡小体形成,胞膜完整。上述结果可排除渗透压对蛋白酶体抑制剂诱导细胞死亡敏感性的影响,支持细系飨赴贏对蛋白酶体抑制诱导细胞死亡敏感性的影响%,无糖培养基细胞死亡率..ィ籄组与楸冉希无糖培养基表现为细胞死亡加重,两组细胞死亡率比较,差异有统计学意义,细胞内ǘ染龆ǖ鞍酌柑逡种朴盏枷赴劳龅拿舾行、.
在有糖培养基表现为细胞死亡由早期凋亡走向晚期凋亡,细胞死亡百分率基本不变。②实验采用右糖培养基,分对照组,椋琈组,椋琈组、椋┪镒饔∈,差异有统计学意义,珹组与長值谖尢桥嘌碌飨赴贏对蛋白酶体抑制诱导细胞死亡的影响在有糖培养基下调细胞内缘鞍酌柑逡种朴盏枷赴劳龅挠跋实验结果表明谟姨桥嘌邢碌飨赴贏时蛋白酶体抑制诱导的细胞疞,组疞,.疞、疞,,橛比较,差异有统计学意义,结果表明系飨赴贏时,蛋白酶体抑制诱导的细胞死亡加重。下调细胞内缘鞍酌柑逡种朴盏枷赴劳雒舾行缘挠跋臁实验采用无糖培养基,分对照组、组、椤椤组、组,药物作用小时,流式细胞术检测显示组细胞死亡率约%,组未见细胞死亡,橄赴劳雎%,组与组细胞死亡率基本相同。实验采用有糖培养基,分对照组,组,椋琌椤组,组,药物作用小时,狥魇较赴跫觳庀允荆组细胞死亡率.%,橄赴劳雎%,两组细胞死亡率比较,差异有统计学意义,甇籓橄赴劳鲆栽缙诘蛲鑫V鳎琈组细胞死亡以晚期凋亡为主。上述结果表明在无糖培养基下调细胞内保鞍酌柑逡种朴盏嫉南赴死亡敏感性基本无变化;而在右糖培养基中下调细胞内保鞍酌柑逡种诱导的细胞死亡减轻。碌飨赴贏对蛋白酶体抑制诱导细胞死亡敏感性的影响实验采用有糖培养基,分对照组、椤组,椋椋┪镒饔∈保魇较赴跫觳庀允綧组细胞死亡率.%,%。死亡减轻,而使用系飨赴贏时蛋白酶体抑制诱