文档介绍：重庆医科大学
博士学位论文
CGRP在高氧诱导肺泡Ⅱ型上皮细胞损伤中的作用及其信号转导
途径探讨
姓名:付红敏
申请学位级别:博士
专业:儿科学
指导教师:匡凤梧;许峰
20090501
在高氧诱导肺泡型上皮细胞损伤中的作用及其第一部分早产胎鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞分离、纯化、培信号转导途径探讨摘要养及鉴定方法目的键里探讨胎鼠肺泡型上皮细胞姆掷搿⒋炕霸嘌方法,建立胎鼠细胞模型,为有关胎儿肺发育及新生儿肺部疾病的研究奠定基础。采用胰酶结合胶原酶的消化方法,分离肺组织细胞成份,然后经差速离心和差速贴壁的方法纯化,进行原代培养;通过台盼蓝染色检测细胞活力,倒置相差显微镜观察细胞生长特点及形态特征,透射电镜鉴定,。每只胎鼠可获得×盍%。镜下观察原代呈岛状生长,外观呈多边形或立方形。┦
第二部分高氧暴露对早产鼠肺泡型上皮细胞的氧化损伤及的保护作用结论目的方法特征性的板层小体,改良巴氏染色见胞质内有较多颗粒,纯度为±%,ü獾南赴ヒ陨稀利用胰酶和胶原酶消化,以及差速离心和差速贴壁的方法可成功分离出高产量、高纯度的胎鼠,能满足体外进一步实验的需要。关键词:胎鼠,肺泡型上皮细胞,原代培养,分离观察高氧对早产鼠肺泡型上皮细胞基因相关肽对的保护作用。将原代分离培养的孕绮驛接种至着嘌澹笛随机分为空气组、高氧组、高氧组、高氧受体拮抗剂组。空气组和高氧组分别置于体积分数为%的空气和%的氧气中暴露桓哐魿樵诒┞肚凹尤隒桓哐魿卓辜磷樵诟哐组基础上加入受体拮抗剂—E嘌后,用分光光度计测定各组丙二醛⒆芸寡趸芰⒊氧化物歧化酶剑挥昧魇较赴羌觳饣钚匝和细胞凋亡率;用逆转录聚合酶链反应钡定表面活性蛋白挠跋煲约敖蹈扑重庆医科大学博士研究生学位论文
第三部分对%氧暴露早产鼠ぴ殖的影响结论方法继里目的的表达。与空气组比较,高氧组及细胞调亡率均显著增高,、,高氧组细胞水平及细胞调亡率均显著下降;而、。%氧暴露傻贾略绮驛发生氧化损伤,;而可部分减轻的氧化损伤,减少凋亡,促进—泶铮愿哐跛鹕说腁起保护作用。关键词:高氧;肺损伤;肺泡型上皮细胞;降钙素基因相关肽探讨降钙素基因相关肽对%氧暴露早产鼠肺泡型上皮细胞ぴ鲋车挠跋臁原代分离培养孕绮驛,随机分为椋嚎掌椤⒖气组、空气拮抗剂组、高氧组、高氧组、高氧重庆医科大学博士研究生学位论文卜气
结论继田拮抗剂组。空气组和高氧组分别在氧体积分数为%的空气和%的氧气中暴露豢掌蚋哐魿樵谥糜诳掌蚋哐趸肪城凹尤;空气或高氧拮抗剂组同时加入和受体拮抗剂后,再置于空气或%的氧气中培养O扔肕比色法测定不同浓度籑哉的实验最佳浓度;分别采用ê土魇较赴醪舛ǜ髯橄赴增殖能力和细胞周期,。ń峁允荆珻狹,呈剂量依赖方式促进正常培养的早产鼠生长,因此选择趣来干预细胞。加入罐还可使正常培养的进入/,。暴露于%,,促进了高氧暴露的增殖能力,使癎疢期细胞增多,,%氧暴露梢种圃绮驛增殖分化,而可促进生长,部分解除高氧对的抑制作用。生长的影响,以确定多,.。重庆医科大学博士研究生学位论文
型上皮细胞损伤的保护作用第四部分藕抛5纪揪督榈剂薈愿哐醴闻方法目的钴里早产关键词:高氧,肺泡型上皮细胞,降钙素基因相关肽,婴儿,通过测定蚇猺的活化情况,从细胞内信号转导通路这一角度探讨对高氧肺泡上皮细胞损伤的保护作用机制。原代分离培养孕绮驛,随机分为椋嚎掌椤⒖气组、空气拮抗剂组、高氧组、高氧组、高氧拮抗剂组。空气组和高氧组分别在氧体积分数为%的空气和%的氧气中暴露豢掌蚋哐魿樵谥糜诳掌蚋哐趸肪城凹尤,空气或高氧拮抗剂组同时加入和受体拮抗剂,再置于空气或%的氧气中培养S肳检测胞膜和胞浆谋泶锉浠す夤簿劢辜觳釴的核表达情况。在正常培养的细胞中加入后,胞膜与胞浆比值显著增高,挠ü┞队诟哐鹾螅び氚琍比值显著低于空气组,而挠ü馇慷雀哂诳掌。高氧组二者比值及核内ü馇慷雀哂诟哐踝榧案哐魿重庆医科大学博士研究生学位论文皇口
结论抗剂组,,;すδ关键词:肺泡型上皮细胞,蛋白激酶艘蜃覭蹈扑鼗相关肽,信号转导,高氧荘行了重庆医科大学博士研