文档介绍：上海交通大学
硕士学位论文
EB病毒对脐带血树突状细胞分化和功能的影响
姓名:王玺
申请学位级别:硕士
专业:儿科学
指导教师:陈同辛
20070514
上海交通大学医学院硕士研究生学位论文
EB 病毒对脐带血树突状细胞分化和功能的影响
摘要
目的:通过建立 EB 病毒(Epstein-Barr Virus,EBV)感染单核细胞
和树突状细胞(dendritic cell,DC)的培养体系,研究脐带血单核细胞和
DC 的 EBV 相关蛋白的表达,探讨 EBV 对脐带血 DC 吞噬功能、表面分
化和成熟标记表达以及细胞因子分泌功能的影响,并且与相同培养条件
下成人外周血单核细胞和 DC 比较,研究两者在病毒相关蛋白表达及细
胞分化和功能变化方面的差异性。以期从抗原提呈细胞这一免疫应答的
起始环节,来阐明 EBV 逃逸宿主免疫监视的可能机制,为临床防治 EBV
感染提供理论和实验依据。
方法:采用 RT-荧光定量 PCR 方法检测病毒相关蛋白基因在单核细
胞和 DC 上的差异性表达。采用流式细胞仪检测细胞表面病毒相关蛋白
的表达、DC 吞噬葡聚糖的能力、以及细胞表面分化和成熟标记表达的阳
性率和相对荧光强度。采用 ELISA 方法和 RT-荧光定量 PCR 方法分别检
测 DC 分泌细胞因子的水平和细胞因子 mRNA 的表达。
结果:在感染 EBV 的脐带血单核细胞表面检测到了病毒相关蛋白早
期抗原(early antigen,EA)和衣壳抗原(virus capsid antigen,VCA)的
表达。RT-荧光定量 PCR 检测到病毒相关蛋白潜伏膜蛋白 1(Latent
membrane protein 1,LMP1)和 BcLF-1 的 mRNA 表达,并且成人外周血
单核细胞和 DC 内 LMP1 蛋白基因模板的拷贝数明显高于脐带血单核细
V
上海交通大学医学院硕士研究生学位论文
胞和 DC。感染 EBV 后,脐带血 DC 吞噬葡聚糖的能力降低;细胞表面
分化和成熟标记与正常对照相比表现为:CD14 分子的下调不明显,而
MHC Ⅱ类分子和协同刺激分子上调不明显,MHCⅠ类分子的表达降低;
细胞因子分泌的改变表现为:LPS 刺激后细胞分泌的 IL-6、IL-10 和 TNF-α
不增高,而 TGF-β1 在 EBV 感染后分泌增高,同时 EBV 还抑制了 IL-12p35
和 IFN-γ的 mRNA 表达。
结论:单核细胞和未成熟 DC 均可被 EBV 感染,并且由于成人外周
血单核细胞和 DC 内 LMP1 蛋白 mRNA 的拷贝数明显高于脐带血单核细
胞和 DC,推测 EBV 在成人外周血单核细胞和未成熟 DC 内更易复制。
EBV 抑制了 DC 的吞噬功能,阻碍了 DC 的分化和成熟,使 DC 摄取处
理抗原和提呈抗原的能力受损。MHC I 类分子的降低导致在控制 EBV
感染中发挥关键性作用的 MHC I 类分子限制性的 CD8+细胞毒性 T 细胞
功能受损。此外,EBV 还使 DC 分泌抑制性细胞因子增加,抑制了宿主
免疫,并且使免疫应答反应向 T 辅助细胞 2 方向偏移,削弱了细胞免疫
功能,以上因素均可导致 EBV 逃逸宿主免疫。
关键词新生儿,脐带血,EB 病毒,树突状细胞,分化,功能
VI
上海交通大学医学院硕士研究生学位论文
THE IFNLUENCE OF EPSTEIN-BARR VIRUS ON THE
DIFFERENTIATION AND FUNCTION OF CORD BLOOD
DENDRITIC CELLS
ABSTRACT
Objective: To investigate the possible immune escape mechanisms of
EBV and to provide the experimental and therotical bases to prevent and
design treatment protocol for EBV infection by detecting the expression of
EBV-encoding proteins, exploring the influence of EBV on endocytosis,
phenotype and cytokines secretion of cord blood dendritic cells. Comparing
the results with th