文档介绍：匆骞押塑账嵩谀鸵└蜗赴┑治疗作用研究博士研究生:高鹏指导教师:方驰华摘要背景肝癌是十分常见的恶性肿瘤。在我国肝癌死亡率居肿瘤死亡率第三位,近年来还有不断上升的趋势。手术切除是肝癌治疗的首选方法,但治疗效果仍然不理想:术后复发、转移,特别是多数肝癌患者确诊时,已属于晚期,限于肿瘤的位置、范围、对重要血管及远处脏器的侵犯与转移、患者肝脏功能储备与全身情况,己无法耐受手术,根治性切除术已难以施行。尽管近年来在局部注射无水酒精、冷冻治疗、射频及微波热固化治疗、放射介入治疗以及生物治疗等综合治疗方面取得了一定的进展,但总体预后仍然较差,并且化疗仍为其主要方法。对化疗药物产生耐药性是肝癌治疗的一大难题,也是综合治疗效果欠佳的重要原因。随着基因技术的发展,基因治疗肿瘤成为研究的热点,研究者们对肝癌的基因治疗做了大量的有意义的研究工作,取得了一些令人鼓舞的结肝癌常见的基因治疗方法有:捎弥琢鲆种苹蚣案谋渲琢龅纳镅为:陨被蛑瘟疲佣岣咭┪锏拿舾行裕肿瘤相关病毒的应用:疫基因治疗:捎枚嘁┠鸵┗颍;ふW橹取K淙桓伟┑幕蛑瘟圃实验室阶段取得了瞩目的进展,但由于基因治疗存在靶基因的选择及安全转染等诸多问题,给基因治疗带来了困难。近年来的研究证明,肝癌的发生、发展涉及多种癌基因的激活和抑癌基因的失活过程,有针对性地选择在肝癌发生、果。博士学位论文
发展过程中发挥重要作用的癌基因,通过反义核酸技术特异性地进行封闭,可望达到治疗肝癌的目的。是新近发现的一种抑制细胞凋亡分子,家族成员。除表达于发育中的胚胎组织外,还广泛表达于人类肿瘤细胞系。研究发现在包括肝癌、乳腺癌、肺癌、结肠癌、卵巢癌、前列腺癌、肾癌、黑色素瘤、白血病、淋巴瘤等的种人类肿瘤细胞株均有表达,而在正常成人分化成熟的组织中几乎不表达。由于仅特异性地表达于肿瘤组织,在正常成人组织几乎不表达,使得应用基因治疗具有良好的靶向性、特异性及安全性。靶向治疗可以促进肿瘤细胞凋亡并抑制其增殖,而对正常组织几乎没有不良影响,还可以通过直接抑制凋亡信号转导过程中最下游的效应分子的活性而阻断凋亡的发生过程,并降低肿瘤细胞对许多化疗药物的敏感性。因此已经成为倍受关注的抗肿瘤治疗的新的靶点。本研究旨在反义寡核苷酸瘟聘伟岸阅鸵└伟┫赴疗方面,进行探讨,为提高肝癌的治疗效果及化疗药物的敏感性寻找新的靶点及思路。目的采用反义技术封闭基因在肝癌细胞中的表达,探讨反义寡核苷酸对人肝癌耐药细胞株鮟一/脑鲋臣暗蛲龅挠跋欤欢匀烁伟┠药细胞株一/泼舾行缘挠跋欤还鄄炱涠匀四鸵└伟┫赴一裸鼠移植瘤的治疗作用。方法本实验共分三部分进行。第一部份:反义寡核苷酸诱导肝癌耐药细胞一/蛲的研究。分别以脂质体介导痬/和痬植煌ǘ鹊姆匆中文摘要
魿一检测鮟一细胞建立人耐药肝癌细胞綾一/浦擦瞿P停闪龊笏婊组:空白甋匆骞押塑账嵊盏几伟┠鸵┫赴鹲删疉凋亡。寡核苷酸转染人肝癌耐药细胞株疉,无义寡核苷酸、脂质体及培养液作为空白对照,采用ḿ觳釹匆骞押塑账岫疉细胞的生长抑制作用:方法检测各组细胞及蛋白的表达情况:流式细胞检测细胞凋亡及细胞周期的变化:透射电镜观察肿瘤细胞的超微结构变化。第二部份:反义寡核苷酸诱导肝癌耐药细胞凋亡及与阿霉素联合化疗的关系研究将培养的人肝癌耐药细胞一/治#褐侍遄H径哉兆椤⒌ゴ阿霉素组、正义寡核苷酸转染组、正义寡核苷酸转染上擅顾刈椤//?擅顾刈椋组,分别进行处理。用ḿ觳庀赴对存活率:—觳鈙蛋白表达。研究反义寡核苷酸对、疉化疗敏感性的影响。第三部份:反义寡核苷酸抑制肝癌裸鼠皮下移植瘤生长的作用研究对照组、脂质体转染组、正义寡核苷酸转染组、痬转染组、/H咀椤/椤7直鹗褂孟嘤Ω春衔锝辛鎏遄⑸洌每隔熳⑸次,共巍9鄄熘琢鎏寤投锏奶逯氐谋浠扑阒琢鲆种坡剩光镜下观察细胞形态的变化;采用免疫组化检测肿瘤组织中变化:、、—觳庵瘟魄昂蟾髯橹琢鲎橹衧和蛋白表达的变化。,可以高效率转染人肝癌耐药细胞綾一/└伟㏒Ⅶ疉细胞生长抑制率:组、博士学位论文—瑆:
瞻锥哉兆椤⒖⒖罩侍遄及正义寡核苷酸组相比,细胞生长率差异显著,⒖罩侍遄椤⒄骞押塑账嶙楹蛃碜在鱿痔匾煨缘膕醮椤⒖瞻锥哉兆椤⒅侍遄H径哉兆椤⒄链转染对照组之间“..觳饨峁鞍自谌四鸵└伟┫赴鸖疉中有高度表达。瞻锥哉兆椤⒅侍遄H径哉兆椤⒄。魇较赴觳猓后綜一/细胞,与空白对照组、脂质体转染对照组、正义链转染对照组相