文档介绍：在职人员申请硕士学位论文河必运斜,
匆骞押塑账嵊盏糑赴蛲龅难芯摘要目的:靶向合成反义寡核苷酸并将其转染至表达阳性的人白血病株细胞中,研究其对细胞增殖和凋亡的影响,并初步探讨凋亡机制。方法:体外培养人红白血病细胞系细胞。针对基因序列,设计合成反义寡核苷酸及错配寡核苷酸,并通过脂质体将其转染至表达阳性的细胞中。实验分组:正常对照组、错配寡核苷酸对照组、脂质体对照组、反义寡核苷酸处理组ǘ确直鹞、/。倒置光显微镜观察转染后细胞形态学变化;锥虫蓝拒染法观察反义寡核苷酸对细胞增殖的影响;噻唑蓝ü鄄靤匆寡核苷酸对细胞的细胞毒作用,及悍蜞奏籉联合反义寡核苷酸对细胞增殖的影响,计算各组细胞的生长抑制率,测定;/双荧光染色后,荧光显微镜下观察转染反义寡核苷酸以及联合反义寡核苷酸处理后细胞细胞核变化,计算各组细胞凋亡率;激酶活性测定方法检测各组细胞中活性;反义寡核苷酸处理细胞后,经狿掷氲鞍祝琖检测细胞中的表达。结果:H綤赴螅ヒ陨的细胞内都可见黄绿色荧光均匀分布,提示转染成功。转染中文摘要、/
螅怪霉庀晕⒕迪驴杉瑂砗蟮腒细胞出现不同程度的细胞皱缩,核分裂相减少,细胞密度下降、漂浮细胞增多等改变。细胞膜完整但出现发泡现象,细胞内可见多个折光性较强的圆形小泡样结构和细胞出芽样改变。其中、/处理细胞后,细胞形态变化较明显。经锥虫蓝拒染法染色后,计数活细胞,ǘ任/保訩赴增殖的抑制作用较小,当ǘ任、疞时,、、后,与正常对照相比,均明显降低。随着浓度的升高,细胞生长抑制率逐渐增高,值为/橐种坡史直鹞.%、.±ァズ.%。错配寡核苷酸对照组和脂质体对照组与正常对照组之间细胞增殖能力差异无显著性意义。不同浓度处理细胞螅赴な到抑制,随着浓度的升高,细胞生长抑制率逐渐升高,。±ピ龀の.%,联合笙赴ひ种坡试龀の.%。不同浓度鞬赴螅璈/双荧中文摘要当直鸫鞬赴//////
光染色可观察到染色质高度浓缩、边缘化,凝集成明亮的团块,即凋亡小体。细胞凋亡率随着ǘ鹊纳高而升高,、橄赴凋亡率分别为.±ァ.%和.±ィ与单独使用处理细胞相比,瓼:蟬螅赴蛲雎拭飨陨。疞组、疞瓼:椤联合橄赴蛲率分别为.±ァ.%和.±ィ徽常对照组与错配寡核苷酸对照组活性无显著差别别为±、±和±。与正常对照组比较,。结论:反义寡核苷酸可抑制细胞增殖,提高细胞对的敏感性,下调细胞中的表达,通过揪队盏糑赴蛲觥关键词:;反义寡核苷酸;细胞;蜞啶;细胞凋亡;胱天蛋白酶中文摘要/.、疞椤鰽分疞
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反义寡核苷酸诱导细胞凋亡的研究前言随着分子生物学和遗传工程的发展,基因治疗恶性肿瘤成为肿瘤治疗的新方法正日益受到人们的重视。基因治疗就是向靶细胞橹导入外源基因,以纠正补偿或抑制某些异常或缺陷基因,从而达到治疗目的。其治疗方式可分成四类:①基因补偿:把有正常功能基因转入靶细胞以补偿缺失或失活。②基因纠正:消除原有异常基因,以外源基因取代之。③基因代偿:外源正常基因表达水平超过原有的异常基因表达水平。④反义技术:用人工合成或生物体合成的特定互补的騌片段或其化学修饰产物抑制或封闭异常或缺失的基因表达。反义技术因不需改变基因结构能对目的基因及其产物进行治疗,是基因治疗中最简单的手段。现在被广泛应用的反义技术主要有:反义寡核苷酸嗣,和干扰是抑制细胞凋亡蛋白琹易宓男鲁稍保悄壳胺⑾值淖钋康牡蛲鲆种因子。由于特异性地表达于肿瘤组织中,而在正常组织不表达,以及它是维持肿瘤细胞分裂增生的客观要求,使其成为肿瘤基因治疗的一个新靶点。本研究选择为对象,靶向合成反义寡核苷酸,并将其转染至表达阳性的细胞中,观察其对细胞增殖及凋亡的影响,并初步探讨机制。研究论文
∠、牛血清、/嗝素、,。%,同时合成错配链。反义链序列为:错配链序列为:涣教趿戳蕉司虼饰以防止核酸酶的降解,薋修饰以便观察转染效率。,.备趸锩副昙堑难蚩雇肐.,主要仪器