文档介绍：青岛科技大学
硕士学位论文
染料亲和色谱复性蛋白质新方法的研究及其应用
姓名:董平军
申请学位级别:硕士
专业:有机化学
指导教师:李峰
20100420
////疘/痩////痩////染料亲和色谱复性蛋白质新方法的研究及其应用摘要关键词:壳聚糖,硅胶,蛋白质复性,染料亲和色谱,多孔生物材料本论文分三部分,第一部分,基于大孔生物材料的染料亲和色谱,发展了一种新型的蛋白质色谱复性新技术;第二部分,基于溶胶一凝胶法,通过氨水溶液简单处理制备了球形硅胶支载的固定化金属亲和吸附剂;第三部分,基于溶胶一凝胶法,通过氢氧化钠溶液简单处理制备了球形硅胶支载的生物吸附剂。⒒诖罂咨锊牧系娜玖锨缀蜕⒄沽艘恢中滦偷牡鞍字色谱复性新技术。采用具有表面大孔结构的壳聚糖一硅基牧献魑的基质材料。利用基质中的氨基,共价偶联亲和染料配基活性蓝得到吸附剂。模型蛋白质过氧化氢酶经疞尿素变性后,可迅速去除变性剂,并通过狢猻奈匠晒κ迪止趸饷傅母葱浴@荧光光谱和过氧化氢酶活性研究考察了变性过程并对色谱洗脱步骤进行优化。与常规吸附复性法相比,可在蛋白质浓度提高倍的条件下进行复性。⑻岢隽酥票感滦陀谢晃藁春匣实挠行揪丁R郧蛐喂杞鹤魑Vг睾恕以壳聚糖有机一无机杂化层作为壳,基于溶胶一凝胶反应,通过氨水简单处理后制备了该吸附剂。在基质上固定金属离子后,即得到吸附蛋白质的固定化金属亲和吸附剂。扫描电镜表征表明,经氨水溶液简单处理后,基质具有稳定的多孔表面。苌浞治霰砻鳎谢晃藁踊桶彼砉炭善苹悼蔷厶堑慕峋佣提高活性氨基的可利用度。采用同步热重一微量热分析进一步对制各的基质进行了表征。在基质表面固定作为特异性亲和配体后,制备了新型固定化金属亲和吸附剂。以DP偷鞍祝ü绞笛榭疾炝烁梦郊恋奈叫阅堋该吸附剂对剿俣瓤臁⑽饺萘看蟆L岢龅姆椒ḿ爸票傅幕试谏析中具有潜在的应用前景。⑻岢隽酥票感滦陀谢晃藁镂郊恋挠行揪丁R郧蛐喂杞鹤魑Vг核、以壳聚糖有机一无机杂化层作为壳,基于通过溶胶一凝胶反应,经氢氧化钠溶液简单处理后制各了该生物吸附剂。:螅朔似渌崛苄匀钡恪Mü庋趸溶液简单处理后发生的湿法相转移,使制备的复合生物吸附剂具有粗糙的表面。制备的生物吸附试剂可以用来处理电镀废水。
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第一章引言蛋白质的性质基因工程技术的迅猛发展揭开了人类生命科学研究的崭新篇章,也开辟了现代生物工业发展的新纪元。将目标蛋白质基因转入原核或真核表达体系中异源表达制备重组蛋白质,已成为目日订临床及工业上获取蛋白质的重要途径。以大肠杆菌为宿主菌的原核表达体系表达周期短、产量高、易于控制,是生产重组蛋白质的首选表达系统。然而,许多蛋白质在大肠杆菌中高效表达时常以包涵体的形式沉积于细胞内。用变性剂溶解包涵体后,人们必须进行蛋白质复性以获得具有生物活性的蛋白质巧】。如何高效复性包涵体蛋白质是基因工程技术面临的一个难题,也是决定基因工程产品能否商业化的关键。随着人类基因组计划的完成和后基因组计划的实施,人们将会更多地面临这一问题的挑战。因此,对蛋白质高效复性技术及复性机理的研究是当前国际上研究的热点,具有重大的学术意义和应用价值。随着生物工程和生物技术的出现,许多重组基因在外源细胞中得以表达出来。作为一个广泛使用的基因受体,大肠杆菌可以提供一种简易的方式生产出大量的目标蛋白。然而,这种表达蛋白通常会在细胞质中形成包涵体,原因在于该系统中新生肽的合成速度往往要比折叠速度快。为了得到正确折叠的活性重组蛋白,在后续的研究中,,英文为“薄5鞍字视谐汕狭Γ郑不同的蛋白质有不同的生物功能。蛋白质是种被嵬ü0芳肽键连成的长链分子,这种长链即所谓的肽链。许多蛋白质还包括飞肽链结构的其他组成成分,这种成分称为配基或辅基。肽链有许多氨基酸通过肽键嗔诹礁霭被嵬讶ヒ环肿铀连接而成。种氨基酸前后沿一定的排列次序形成特定的结构。当氨基酸组成及它们的排列次序和长短不同时,就形成了不同的蛋白质;或者,不同的蛋白质有特定的氨基酸序列。.鞍字实慕峁根据蛋白质结构有不同的层次,可分别称之为蛋白质的一级结构、二级结构、青岛科技人学研究生学何论文
·≮憩’蛋白质的变性三级结构及四级结构。一级结构是指肽链中的氨基酸排列序列。蛋白质的二级结构也称为构象单元,因为它们是蛋白质复杂的空间构象的基础。常见的构象单元有:螺旋:折叠:转角:无规则卷曲。一些构象单元的结构不是不可改变的,、温度、溶剂极性等环境因素可以影响单元的变化。具有二级结构的的