文档介绍：基因扩增( PCR )实验室辽阳鑫宇实验室设备安装工程有限公司技术部-2- 前言基因扩增检验实验室一文, 是根据国家有关法律、法规和技术规范, 进行选编、择录和收集有关资料、文章而编写的。选编和择录有关技术规范等,如有错误是编著人理解有误,编者表示歉意。本文的平面图由黄海江、效果图赵玉、录入周悦同志完成。柏松枫、何兴福、张璐、张伟卓、赵馨、赵俨、熊洁萌等编写。陈洪柱参与校对。总经理郎宪明(高级工程师)编导。本文为内部参阅资料,仅供参考。 2015 年2月-3- 基因扩增( PCR )实验室基因扩增检验方法( 简称 PCR ) 灵敏度高、特异性强、精确快捷、适用范围广等特点。在生物学、医学科学研究、转基因产品、临床检测、疾病与动物疫病预防和控制、公安侦查等相关专业和学科广为应用。但是, PCR 检验实验室应用时需保证实验安全、设置合理的实验室、规范的操作程序和严格的管理制度。近几年,对 PCR 实验室建设越来越得到重视, 因为对检测结果的可靠性、准确性和安全性起到至关重要作用, PCR 实验室设计核心问题是如何避免污染。实验室的平面布局、空调通风系统运行、气流控制等都是围绕防止污染这个核心进行设计和建设。 1. PCR 实验室组合形式 PCR 实验室可以是分散形式, 也可以是组合形式, 现在主要是以组合形式为主。分散形式 PCR 实验室各功能区间分散, 又有一定的间距, 不会造成区间干扰, 因此没有特定要求。由于工作流程的不便利, 在新组建的 PCR 实验室时往往不被采用。组合形式 PCR 实验室在较大空间实验用房相邻布置依次划分各功能区域, 形成一个组合形式完成基因扩增分析的 PCR 实验室, 各区间在物理空间上完全相-4- 互独立, 各区间无论是在空间还是在使用中, 始终处于完全的分隔状态。但是, 各实验区间集中布置, 容易造成相互干扰, 因此对总体布局以及屏障系统具有一定要求。对实验室的空调通风系统、气流流向、大气压力、人物流程等方面, 在实验室设计和装修上需进行合理考虑。 2. PCR 实验室的区域设计 PCR 实验室分区 PCR 实验室可分两个工作区域:核酸扩增前区和核酸扩增后区。核酸扩增前区包括试剂准备区和样品处理区,设在不同房间或区域; 核酸扩增后区包括扩增区和产物分析区,设在不同房间或区域。 PCR 实验室根据使用仪器的功能合理设置各个区域, 如采用聚合酶联反应:则设置试剂储存和准备区、标本制备区、扩增区、扩增产物分析区四个单独的工作区域。样品需要粉碎处理的, 还需增设样品粉碎区; 若使用实时荧光 PCR 法: 基因扩增区、基因产物分析区可以合并; 采用标本处理、核酸提取及扩增检测为一体的全自动化 PCR 分析仪, 则标本制备区、扩增区、扩增产物分析区可合并为一个区域, 因此 PCR 实验室原则上设置五个区或四个区或三个区或二个单独的工作区。核酸扩增前区和核酸扩增后区可设在一个房间内,但必须在满足下列要求的前提下: 核酸扩增前区实验室内设置两个不同位置的实验区, 试剂配置在超净工作台中操作,样品处理在生物安全柜内操作。在核酸扩增后区使用全封闭的扩增和检测系统时,如-5- 实时荧光 PCR 仪等。每个实验人员使用各自的试剂、耗材、移液器和盛放污染物的盛器。在实验前后对操作区域和共享器具进行清洁及消毒。各区域的试剂、器具、仪器和设备为该区专用,不得交叉使用。 PCR 实验室各区域功能: 试剂储存和准备区:扩增试剂的制备、试剂的分装和扩增反应混合液的制备以及离心管、吸头等消耗品的储存和准备。标本制备区:样品登记、处理和分装;核酸( RNA/DNA ) 提取、保存和使用; PCR 扩增的第一轮加样。对于涉及样本的操作应符合生物安全二级实验室防护标准或更高。基因扩增区: cDNA 合成和 DNA 扩增。如果在此区进行套式 PCR 的第二轮加样,应在 PCR 防护罩内进行。扩增产物分析区: 扩增产物的电泳、杂交、成像、序列测定、变性高效液相分析、结果分析、登记及报告。工作区域设备和仪器的配置。试剂储存和准备区 2-8 ℃和-20 ℃以下的冰箱、普通离心机、超净工作台、混匀器、微量加样器(覆盖 -1000 μL) ,消耗品(一次性手套、耐高压处理的离心管和加样吸头)、专用工作服工作鞋(套)、专用办公用品和废弃物容器、可移动紫外线灯。-6- 标本制备区 2-8 ℃冰箱、-20 ℃(或-80 ℃)冰箱, 生物安全柜、高速制冷离心机( 台式)、混匀器、恒温水浴箱或加热模块、制冰器或制冷模块、