文档介绍：摘要
农杆菌介导法转化棉花是目前棉花转基因的最主要的方法,但用此法转化棉花后诱导成苗的
过程中以上为畸形苗,这已成为棉花转基因的瓶颈,严重制约着转基因效率。
本研究采用农杆菌介导法转化棉花纤维改良基因,得到抗卡那霉素植株,验证纤维改良
基因已成功转入棉花。优化农杆菌介导法转化棉花的主要技术参数,拓宽了棉花基因型范围,建
立了四个棉花品种的高效遗传转化体系。研究发现采用嫁接技术,可使转基因植株成活率达到
以上,可有效提高转化成效。
对棉花胚状体染色体制片技术进行了大量研究,摸索出了适合棉花胚状体染色体制片的流
程。染色体观察发现不同品种的胚状体均存在染色体变异,且以染色体数目介于条的非
整倍变异细胞为最多,不同品种的染色体变异率差别很大,胚胎发生能力弱的品种染色体变异率
高。
转化后采用平行实验得到不同品种的不同培养体系的愈伤组织、胚性愈伤组织、胚状体、类
胚状体、畸形苗和正常苗,以最终正常苗诱导率高的体系的材料作为正常苗的发生过程,以诱导
率低的作为畸形苗的发生过程,即分为正常苗的发生过程,愈伤组织—球型胚状体—心型胚
状体—鱼雷型胚状体阶段一一子叶型胚状体一一正常苗畸形苗的发生过程,愈伤组织一一类
球型胚状体一类心型胚状体—类鱼雷型胚状体阶段—类子叶型胚状体—畸形苗。以测量
大田种子形成过程和种子萌发过程中内源激素的动态变化做参照系,测量两再生苗发生过程的不
同发育时期的内源激素的动态变化,结果表明,黄绿色的胚性愈伤组织与球型胚为棉花体细胞胚
胎发生的两个关键时期,亦是两个转折点畸形苗发生过程中的内源激素含量在球型胚之后比正
常苗高分化过程中球型胚状体阶段的和的低含量和细胞分裂素含量下降慢是导致畸形
苗最终发生的原因之一, 值的高峰的推迟也是造成使畸形胚状体及畸形苗的原因之一
在心型胚状体阶段适当降低值,以来诱导正常胚状体和正常苗。
关键词转化内源激素染色体纤维改良基因棉花
独创性声明
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导师签名布
于产不守了时间年
中国农业科学院硕士学位论文引言
引言
,,植物组织培养过程中畸形苗发生机理研究进展
自年和从胡萝卜愈伤组织和悬浮细胞体系中获得体细胞胚以来,植物
组织培养技术得到了迅速发展。但是在植物组织培养过程中常伴随大量崎形苗的产生,影响植物
组织培养技术的发展和应用。对其发生原因和防治措施的研究,一直受到重视。年
等明确提出了试管植物“玻璃化作用”的概念,并进行了比较系统的研究。等
提出培养基的水势影响畸形苗的形成,而在其中起作用的只是衬质势,渗透势对其并不影响
指出畸形苗是生长因子不平衡的产物而李文安又指出畸形苗产生的条
件能使植物中毒等等。总之,近几十年来,虽然植物组织培养中畸形苗的发生受到较多的关注,
但其诱发机理至今尚无定论,不同植物、不同外植体畸形苗的成因不尽相同。
畸形苗发生的普遍性
畸形苗主要表现为玻璃化苗。自从等最早描述了石竹茎尖培养时所出现的
半透明状形态异常苗以来,畸形苗的研究逐渐受到重视。李秀兰等的研究表明,在棉花
组织培养中经常出现畸形苗,其产生的频率很高,尤其经过液体悬浮培养的胚状体容易形成玻璃
状苗。李付广等发现即使易于体细胞胚胎发生的陆地棉品种其再生苗也多为畸形苗。在
花卉组织培养中亦存在严重的玻璃化现象。迄今为止,已发现在多种植物组织培养中存在玻璃化
现象,在草本及木本植物中均有发生。
较之正常苗。玻璃化苗无论从形态、解剖结构和生理生化等方面均有明显的差别
畸形苗的形态学和生理生化指标变化
奇形苗的形态学上的变化
与正常苗相比,玻璃化苗整棵植株呈半透明状,同时节间很短或几乎没有节间而形成莲座叶
丛状,茎粗而短或细而长,叶片变厚,常皱缩并纵向卷曲脆弱易破碎且表面缩小或增大,其颜
色也不太正常针叶树种叶片常相互粘在一起玻璃化苗很难生根。