文档介绍：河南农业大学
硕士学位论文
猪繁殖与呼吸综合征荧光定量PCR检测方法建立及其应用
姓名:孟韩冰
申请学位级别:硕士
专业:兽医学
指导教师:魏战勇
20090501
摘要猪繁殖与呼吸综合征以母猪发热、厌食、流产、死胎、产木乃伊胎和弱仔等繁殖障碍以及仔猪的呼吸道症状和高死亡率为特征,由猪繁殖与呼吸综合征病毒引起,给全球养猪业造成相当严重的经济损失,目前对于本病尚无有效的药物进行治疗,主要依靠疫苗预防接种。因此利用体外增殖该病毒及研究其在猪体内的增殖规律显的尤为重要。本研究建立了检测与诊断猪繁殖与呼吸综合征椒ḿ巴毖芯吭贛赴械脑鲋彻律和在猪体内的增殖规律及分布,旨在为牧餍胁⊙А⒁卟≡し赖认喙亓煊虻难芯提供依据。主要研究内容如下:设计并合成一对特异性引物,通过从病料中提取总⒛孀B嘉猠琍扩增,产物纯化后与靥辶樱;蟪Ω司鶭,筛选后得到重组标准品质粒,作为模板,且对反应的退火温度、引物浓度等进行优化,然后以优化的条件建立一种能够快速、灵敏地检测腟瓽凳庇ü舛縋诊断方法。结果显示值与标准品浓度的对数之间存在良好的线性关系,线性范围广,一个循环都能测出;稳定性、重复性好。用该方法对莶煌淖橹方辛酥馗醇觳猓峁砻鳎梅椒ň有良好的重复性,,可以在原代猪肺泡巨噬细胞赴及细胞系上生长繁殖,但引起细胞病变不明显,对于其增殖规律不甚了解。本试验采用实时荧光定量际酰芯恐矸敝秤牒粑酆险鞑《驹贛细胞中的增殖规律;结果显示病毒在接种后J即篥驹鲋常鲋匙钗Q杆伲达到病毒增殖最高峰;该结果为疫苗生产提供了试验基础,同时也为研究猪繁殖与呼吸综合征病毒病理学研究提供了试验基础。猪繁殖与呼吸综合征感染的特点之一是持续性感染和病毒血症。本研究应用建立的荧光定量觳釶的方法,检测猪繁殖与呼吸综合征病毒醵疽苗人工感染断奶前后的仔猪后各器官不同时间段的病毒含量,结果表明:在攻毒竽艽消化系统及血液、心脏和肝脏中检测到病毒徊《綬的含量在蟠锏阶罡叻澹⒁直维持至K婧蟾鞔煸嗥髦胁《綬含量持续降低,但在笕阅艽臃啾恪⒏卧嗪脾脏中检测到少量的病毒1臼匝槲2鱌的致病机理及防控提供了重要的试验数据和理论依据。关键词:猪繁殖与呼吸综合征病毒:荧光定量辉鲋彻媛桑呵撸喝斯じ腥荆禾迥诜植猪繁殖‘粑酆险饔ü舛縋检测方法建立及其应用
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导师签名秭圆研究生躲卿欲,日期:芗彩翩签名蕊嘟研究生签名宝讳水挂日期::纅月、鸱日期:弘瞻、朔取日河南农业大学学位论文独创性声明、使用授权及知识产权归属承诺书独创性声明学位论文使用授权及知识产权归属承诺方法建立及其应用本人呈交论文是在导师指导下进行的研究工作及取得研究成果,除了文中料,指导教师对此进行了审定。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献本人完全了解河南农业大学关于保存、使用学位论文的规定,即学生必须按照学校要求提交学位论文的印刷本和电子版本;学校有权保存提交论文的印复制手段保存、汇编学位论文。本人同意河南农业大学可以用不同方式在不同本人完全了解《河南农业大学知识产权保护办法》的有关规定,在毕业离开河南农业大学后,就在校期间从事的科研工作发表的所有论文,第一署名单位为河南农业大学,试验材料、原始数据、申报的专利等知识产权均归河南农业大学所有,否则,承担相应的法律责任。,解密时间年月特别加以标注和致谢的地方外,文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果,也不包括为获得河南农业大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材均已在论文中做了明确的说明,并表示了谢意。刷本和电子版本,并提供目录检索和阅览服务,可以采用影印、缩印或扫描等媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。学位论文是否保密否日
致谢律己、宽以待人的崇高风范,朴实无华、平易近人的人格魅力对我影响深远。本研究及学位论文是在导师魏战勇老师的悉心指导下完成的。导师渊博的专业知识,严谨的治学态度,精益求精的工作作风,诲人不倦的高尚师德,严以不仅使我树立了远大的学术目标、掌握了基本的研究方法,还使我明白了许多待人接物与为人处世的道理。本论文从选题到完成,每一步都是在导师的指导下完成的,倾注了导师大量的心血。在此,谨向导师表示崇高的敬意和衷心的感谢本论文的顺利完成,离不开其它各位老师、同学和朋友的关心和帮助。在此感谢那些对我有过指导和帮助的人们,感谢他们对我的关心、支持和帮助。最后,向培育我成长的母校致以最崇高的敬礼猪繁殖与呼吸综合征荧光定量觳夥椒ń⒓