文档介绍：16S rDNA基因的PCR扩增
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PCR技术简史
DNA的复制
核酸体外扩增的设想
聚合酶链反应的发明
ATCGCGATAGCGTAGCTGCGACCTAGC
5’
3’
TAGCGCTATCGCATCGACGCTGGATCG
3’
5’
解旋酶
解链酶
DNA
解旋解链
合成引物
子链延长
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DNA的复制
核酸体外扩增的设想
聚合酶链反应的发明
ATCGCGATAGCGTAGCTGCGACCTAGC
5’
3’
TAGCGCTATCGCATCGACGCTGGATCG
3’
5’
DNA
解旋解链
合成引物
子链延长
GGAUCG
5‘
AUCGCG
5‘
引物酶
引物酶
RNA引物
RNA引物
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DNA的复制
核酸体外扩增的设想
聚合酶链反应的发明
ATCGCGATAGCGTAGCTGCGACCTAGC
5’
3’
TAGCGCTATCGCATCGACGCTGGATCG
3’
5’
DNA
解旋解链
合成引物
子链延长
GGAUCG
5‘
AUCGCG
5‘
TAGCGCTATCGCATCGACGCT
3’
ATAGCGTAGCTGCGAGGATCG
3’
DNA
聚合酶
DNA
聚合酶
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DNA的复制
核酸体外扩增的设想
聚合酶链反应的发明
1971年，Khorana提出：经过DNA变性，与合适引物杂交，用DNA聚合酶延伸引物，并不断重复该过程便可克隆tRNA基因。
但由于测序和引物合成的困难，以及70年代基因工程技术的发明使克隆基因成为可能，所以，Khorana的设想被人们遗忘了……
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DNA的复制
核酸体外扩增的设想
聚合酶链反应的发明
1985年，美国PE-Cetus公司的Mullis等人发明了聚合酶链反应（PCR）
基本原理是在试管中模拟细胞内的DNA复制
最初采用E-coli DNA聚合酶进行PCR，由于该酶不耐热，使这一过程耗时，费力，且易出错
耐热DNA聚合酶的应用使得PCR能高效率的进行，随后PE-Cetus公司推出了第一台PCR自动化热循环仪
1993年，Mullis等因此项技术获诺贝尔化学奖
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Kary B. Mullis
<<The Unusual Origin
of the Polymerase Chain Reaction>>
1989年美国《Science》杂志列PCR 为十余项重大科学发明之首,比喻1989年为PCR爆炸年,Mullis荣获1993年度诺贝尔化学奖。
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生物样品
DN***段
基因诊断
基因治疗
基因工程产品
法医学检测
人类学研究
……
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基因组DNA
获取特定DN***段
扩增特定DN***段
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94℃变性
50-65℃退火
XX℃延伸
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