文档介绍：EHA105根癌农杆菌
编号
名称
北京华越洋生物NRR01040
EHA105根癌农杆菌
基本信息:
名称：EHA105根癌农杆菌
规格：300ul甘油菌
储存温度:-80°C
基因组：
C58 (rif R) Ti pEHA105 (pTiBo542DT-DNA) (strepR) Succinamopine 简介：
EHA105菌株由EHA101菌株改造而来，为C58型背景，核基因中含有筛选标签一一利福平抗性基因rif,为了便于转化操作，此菌株携带一无自身转运功能的琥珀碱型Ti质粒pEHA105 (pTiBo542DT・DNA),此质粒含有vir基因(vir基因是T-DNA插入植物基因组必需的元件，pEHA105 (pTiBo542DT-DNA)质粒自身的T-DNA转移功能被破坏，但可以帮助转入的双元载体T-DNA顺利转移)。pEHA105 (pTiBo542DT・DNA)型Ti质粒含有筛选标签：strep,赋予EHA105菌株链霉素抗性，适用于水稻、烟草等植物的转基因操作。EHA105菌株可在YEB或LB培养基上生长，培养最适温度为28。。耗氧型，用30%的甘油可保藏菌种。质粒转化的方法为电转化。
操作说明：
本品包含一份甘油菌，使用本甘油菌时可以不用完全融解，在甘油菌表面龍取少量涂板或进行液体培养即可。也可以完全融解后使用，但随着冻融次数的增加，细菌的活力会逐渐下降。
为保证菌种纯正，避免其它细菌污染，尽量先划平板，然后再挑单克隆菌落进行后续操作。
冷冻管开封：
用浸过75%酒精的脱脂棉严格消毒冷冻管盖。
菌株复溶：
无菌环境中旋开装有复溶液的滴瓶盖，吸収lml左右复溶液，加入到冷冻管中。轻轻振荡，使冻干菌株溶解呈悬浮状。
菌株复壮：
用无菌吸管吸取菌悬液，转移到复溶液滴瓶中。做好标识，在适宜温度下培养。细菌在30-35°C培养箱中培养24-48h,真菌在23-28°C培养箱中培养24-72h (必要时，可适当延长培养时间)。
菌株传代：
将得到的菌株的新鲜培养物转接到适宜的固体培养基及液体培养基中(尽量增大接种輦：如用尢菌吸管吸取M50U1新鲜培养物至固体培养基，边移动边缓慢释放)，适宜温度下培养，用以菌株的保藏、传代及制备