文档介绍：第卷第期热带生物学报..
年月.
文章编号:———
影响根癌农杆菌感受态细胞
转化效率因素的研究
高世武,郭晋隆,阙友雄,许莉萍,杨颖颖,陈如凯
福建农林大学农业部福建甘蔗生物学与遗传育种重点开放实验室,福建福州
摘要:通过对菌株不间断培养观察,绘制出其生长曲线图;同时用不同浓度的,溶液分
别制备根癌农杆菌的感受态细胞,在转化过程中用不同的温度进行热激处理,统计分析阳性转化
子个数,明确了采用冻融法将外源导人农杆菌时的几个影响因素的参数。结果表明,当
值在.—.之间时,根癌农杆菌正处在对数生长期,活力最强;制备感受态细胞时,
溶液的浓度在~· 之间,无显著差异,但以· 效果最佳,转化率达.。·
~,热激处理温度在~℃之间均无显著差异,但℃处理时转化率最高,达.×。· 一。
关键词:根癌农杆菌;生长曲线;冻融法;转化率
中图分类号: 文献标志码:
自从年等¨发明了农杆菌介导的烟草叶盘转化法以来,农杆菌介导的基因转化技术
得到了快速发展。通过农杆菌介导获得转基因植物的报道也越来越多,如水稻、玉米、小麦、棉花、西红柿
等。根癌农杆菌是种革兰氏阴性土壤杆菌,含有种环形的质粒
,,当其侵染植物细胞后,
因组中,并能稳定遗传给后代,可作为外源进人植物细胞的载体。但在农杆菌介导的基因转化过
程中,将携带外源基因载体质粒导人农杆菌是第个限速步骤。目前将重组质粒导人农杆菌的方法有多
种,但都存在着一些弊端。例如,三亲杂交法,其操作繁琐,转化过程长达,并且需要辅助质粒;电激
转化法需要昂贵的仪器和耗材,转化条件严格;相比之下,冻融法虽然转化效率低¨,但由于其操作简
单,不需昂贵的仪器和耗材,因此,在普通实验室中得到了广泛的应用。
影响冻融法转化效率的主要因素有农杆菌的生长状态、感受态细胞的质量、转化时的热激温度
等¨卜,由于培养基及农杆菌菌株不同等原因,各文献报道的优化条件有所不同。为此,本试验以根癌
农杆菌为受体细胞,并用多梯度不同浓度的处理,使其处于感受态,然后使用本实验室自
己构建的植物表达载体质粒进行转化,分析根癌农杆菌的生长状态、不同浓度
所制备感受态细胞的质量以及转化时的热激温度对根癌农杆菌转化效率的影响,筛选出
具有较高转化效率的优化条件,旨在为根癌农杆菌介导的基因转化试验提供参考依据。
材料与方法
. 材料
.. 菌株及质粒根癌农杆菌菌株由农业部甘蔗遗传改良重点开
收稿日期:——
基金项目:国家自然科学基金项目;国家高技术研究发展“”计划项目;福
建省科技厅国家科技项目;现代农业产业技术体系建设专项资金项目一
——
作者简介:高世武一,男,河南南阳人,福建农林大学农业部福建甘蔗生物学与遗传育种重点开放实验
室助理研究员。硕士.
通信作者:陈如凯..:.
第期高世武等:影响根癌农杆菌感受态细胞转化效率因素的研究
放实验室提供,植物表达载体由本实验室自己构建,含有,Ⅳ尸Ⅱ,等基因,具有卡那
霉素抗性。
.. 培养基培养基成分:.·~;.·~;.‘~;
··~;.·~;.固体培养基中含· 的琼脂粉。
. 试验方法
.. 农杆茵茵株生长曲线的建立根据细菌生