文档介绍：第二章菌种与种子扩大培养
本章讲述内容
第一节微生物工业用菌种
第二节种子扩大培养
第一节微生物工业用菌种
一、菌种的分离筛选
1、菌种的来源
根据资料直接向有科研单位、高等院校、工厂或菌种保藏部门索取或购买;
从大自然中分离筛选新的微生物菌种。
2、分离思路
新菌种的分离是要从混杂的各类微生物中依照生产的要求、菌种的特性,采用各种筛选方法,快速、准确地把所需要的菌种挑选出来。
实验室或生产用菌种若不慎污染了杂菌,也必须重新进行分离纯化。
有了优良的菌种,还要有合适的工艺条件和合理先进的设备与之配合。
定方案:首先要查阅资料,了解所需菌种的生长培养特性。
采样:有针对性地采集样品。
增殖:人为地通过控制养分或培条件,使所需菌种增殖培养后,在数量上占优势。
分离筛选:采用选择性培养基利用分离技术得到纯种目的菌。
发酵性能测定:进行生产性能测定。这些特性包括形态、培养特征、营养要求、生理生化特性、发酵周期、产品品种和产量、耐受最高温度、生长和发酵最适温度、最适pH值、提取工艺等。
3、新种分离与筛选的步骤
(1)采样
采样对象:以采集土壤为主。
采样季节:以温度适中,雨量不多的秋初为好。
采取土壤样品要考虑的几个问题
土质肥,微生物含量高,特别肥沃的土壤中细菌多,放线菌少;在植物残体枯枝落叶下的土壤中较多含有拮抗性真菌。
离地面5~20cm处的土壤通气良好、不受阳光直射,含菌量最高。
采土季节以春秋两季最好。
采土方法:选择适当地点、铲除表土、取土样数十克,盛入事先准备的无菌防水纸袋中,其上记录采土时间、地点、植被情况等。
多点采土、混合分离,可以代表每一地块上的微生物分布平均情况
(2)增殖培养
含有目的菌较多的土样不需要富集培养
如果原有样品中目的菌含量低,可以人为地添加相应的基质,培养使之以较其它微生物更快的速度生长繁殖,从而提高它们在样品中的比例,便于分离。
富集培养的一般方法:采用有利于目的菌种而不利于无关微生物的营养和培养条件,以达到使目的菌种在群体中比例上升的目的。
例如碳源利用的控制,可选定糖,淀粉、纤维素,或者石油等,以其中的一种为唯一碳源,那么只有利用这一碳源的微生物才能大量正常生长,而其它微生物就可能死亡或淘汰。这样对下阶段的纯种分离就会顺利得多。
一些有特定物质产生能力的菌种,不容易富集,只有通过大量艰苦的工作筛选取得。
(3)培养分离
尽管通过增殖培养效果显著,但还是处于微生物的混杂生长状态。因此还必须分离,纯化。在这—步,增殖培养的选择性控制条件还应进一步应用,而且控制得细一点,好一点。纯种分离的方法有划线分离法、稀释分离法。
稀释分离法
稀释倒
平板法
平板
涂布法
注意:必须要做多个浓度的稀释分离平板。