文档介绍：微生物限度检查方法的验证
微生物限度检查方法的验证
细菌、霉菌、酵母菌计数方法的验证
——准确性(回收率)
控制菌检查法的验证——专属性
细菌、霉菌、酵母菌计数方法的验证
验证的目的:
确认所采用的方法适合该药品的细菌、霉菌、酵母
菌数的测定。照此检查法和检验条件进行供试品细菌、
霉菌、酵母菌数检查能保证检验结果的准确、可靠。
细菌、霉菌、酵母菌计数方法的验证
验证的步骤:
根据样品特性,制定检验方法和检验条件。
保证验证试验所用的仪器、培养基和试剂等均符合试验要求。
按制定的方法进行试验。
根据验证结果,判断是否符合验证的标准。若符合,按验证的方法和条件进行药品的微生物限度检查;若不符合,应重新设立验证方案,再进行验证,直至验证结果符合设立的验证标准。
细菌、霉菌、酵母菌计数方法的验证
验证时,按供试液的制备和细菌、霉菌及酵母菌计数所规定的方法及要求进行。对各试验菌的回收率应逐一进行验证。验证试验至少应进行3次独立的平行试验,并分别计算各试验菌每次试验的回收率。
细菌、霉菌、酵母菌计数方法的验证
细菌计数验证用菌株:大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯
草芽孢杆菌。
霉菌、酵母菌计数验证用菌株:白色念珠菌、黑曲霉。
菌株选择的原则:代表性,普遍性,低或非致病性,标准
菌株(或该药品中常见的污染菌)。
菌种的要求:不得超过5代。采用适宜的方法保存。加菌
量:50~100cfu。
细菌、霉菌、酵母菌计数方法的验证
验证方法选择:平皿法(包括稀释法)、薄膜过滤法、
中和法、离心沉淀法、联合方法。
样品稀释级的选择:最低稀释级,1g或1ml。
培养基:营养琼脂、玫瑰红钠琼脂、改良马丁培养基、
营养肉汤培养基、改良马丁琼脂培养基。
细菌、霉菌、酵母菌计数方法的验证
菌液制备
(1)接种金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌
的新鲜培养物至10ml营养肉汤中,35~37℃培养18~24小
时,%无菌氯化钠溶液9ml,采用10倍
递增稀释法,稀释至10-5~10-7,使菌数约为50~100cfu
/ml。
细菌、霉菌、酵母菌计数方法的验证
菌液制备
(2)接种白色念珠菌的新鲜培养物至10ml改良马丁培养
基中,23~28℃培养18~24小时,%
无菌氯化钠溶液9ml,采用10倍递增稀释法,稀释至10-5~
10-7,使菌数约为50~100cfu/ml。
细菌、霉菌、酵母菌计数方法的验证
菌液制备
(3)接种黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培
养基上, 23~28℃培养5~7天,加3~%无菌氯
化钠溶液洗下霉菌孢子,吸出菌液,取 %
无菌氯化钠溶液9ml,采用10倍递增稀释法,稀释至10-4~
10-6,使菌数约为50~100cfu/ml。