文档介绍：HP1100液相色谱培训
实验目的:
学习掌握仪器原理、结构、应用及仪器使用注意事项。掌握色谱工作站的使用,独立操作,建立分析方法,优化色谱条件,配制标准溶液,建立标准曲线,准确分析待测样品浓度。
基本原理:
色谱仪是用来分析分离混合物的仪器,它是利用混合物各组分在固定相和流动相上的分配系数不同,对物质的组分进行分离,定性定量分析。液相色谱主要用于高沸点、遇热易分解以及具有生物活性的组分的分析分离。
本次培训重点针对HP1100系列液相色谱的二极管阵列DAD检测器、四元泵、手动进样器及比较常用的化学键合固定相C18柱(反相柱)的原理、结构、应用及仪器使用注意事项进行基本操作训练,掌握用外标法准确定量的要点及注意事项,掌握1100色谱工作站的仪器开关设置数据采集数据处理打印数据谱图报告的方法。
化学键合固定相
化学键合相色谱法是由液液分配色谱法发展而来。分配色谱法虽然分离效果好,但由于固定液的流失,会使柱效和分离选择性下降。
流失的固定相会使基线的噪声增加,降低了检测器的灵敏度。
化学键合相色谱法已逐渐取代液液分配色谱法,广泛应用,在高效液相色谱法中占有极其重要的地位。
根据键合固定相与流动相的相对极性的强弱,可分为正相键合相色谱和反相键合相色谱。
反相键合相色谱的键合固定相极性小于流动相的极性,适合分离非极性、极性和离子型化合物。应用范围比正相键合相色谱更为广泛,约70%-80%的分析任务皆由反相键合相色谱法完成。
非极性烷基键合相是目前最广泛应用的柱填料,尤其是十八烷基硅烷键合相(Octadecylsilyl,简称 ODS-C18) 在反相液相色谱中发挥着重要作用,它可完成高效液相色谱分析的大部分任务。
化学键合固定相是将各种不同基团通过化学反应键合到硅胶(担体)表面的游离羟基上,是目前应用最广、性能最佳的固定相;主要有
a. 硅氧碳键型: ≡Si—O—C
b. 硅氧硅碳键型:≡Si—O—Si — C
稳定,耐水、耐光、耐有机溶剂,应用最广;
c. 硅碳键型: ≡Si—C
d. 硅氮键型: ≡Si—N
化学键合固定相的特点
(1)传质快,表面无深凹陷,比一般液体固定相传质快;
(2)寿命长,化学键合,无固定液流失,耐流动相冲击;耐水、耐光、耐有机溶剂,稳定;
(3)选择性好,可键合不同官能团,提高选择性;
(4)有利于梯度洗脱;
存在着双重分离机制:
(键合基团的覆盖率决定分离机理),
高覆盖率:分配为主;
低覆盖率:吸附为主;
流动相:对于亲水性固定液,采用疏水性流动相,即流动相的极性小于固定液的极性(正相 normal phase)