文档介绍：
酶的固定化方案
酶的固定化的方案

一、材料和方法
酶，25%戊二醛溶液，带氨基的载体，考马斯亮蓝，牛血清白蛋白。 2. 主要试验仪器
紫外可见光分光光0ml的离心管中，向其中参加体积为2ml的必须浓度的酶液(、)。然后于冰浴中缓慢振荡24h。、2%的戊二醛溶液，接着振荡10h，离心收集固体。最终用一样的磷酸缓冲液洗涤固体5次以上。

d. 考马斯亮蓝法测定蛋白质浓度
固定化时溶液中的蛋白质含量采纳考马斯亮蓝染色法测定：
考马斯亮蓝试剂的配制：将考马斯亮蓝 G-250 101mg 溶于 50mL 95%乙醇中，参加101mL 85%磷酸，用蒸馏水稀释至 1010mL。
标准蛋白溶液的配制：以牛血清白蛋白为标准蛋白，用蒸馏水配臵成的蛋白溶液。
制作标准曲线：分别取 - 的标准蛋白溶液于试管中，用蒸馏水加至 1mL，然后参加考马斯亮蓝试剂 5mL，摇匀，放臵 5min 后用分光光度计在 595nm 处测定吸光度。以吸光度为纵坐标，标准蛋白含量为横坐标绘制标准曲线

样品测定：取样品溶液 1mL，样品蛋白质含量高时，可将取样量削减，并有蒸馏水补至 1mL。参加考马斯亮蓝试剂 5mL，摇匀，放臵 5min 后用分光光度计在 595nm处测定吸光度。依据标准曲线计算出样品溶液的蛋白质含量。

二、固定化工艺条件的选择 (1) 固定化温度的选择
将，600μL酶和 10mL缓冲液()混合后分别在 25、30、37、45、55℃下固定5h，测定各温度下脂肪酶的固定化率和相对酶活力。因为较高温度下蛋白分子运动加剧，减小了酶的扩散限制作用，使酶分子能更快扩散进入载体的孔道内并与载体发生相互作用，加快固定化。但高温会破坏蛋白质的构造，导致酶因热变性而失活。
(2) 固定化ph值的选择
将，600μL酶分别和pH为、、、、、、、、、的 10mL缓冲液混合后在 30℃下固定 5h，并测定各pH值条件下的固定化率和相对酶活力。缓冲液的pH值会影响酶分子四周的离子微环境，从而影响固定化酶的活力，在特定的pH值条件下，酶分子的活性基团能处于最正确的离子状态，从而使酶显示出较高的活力。
(3) 固定化时间的选择
将，600μL酶和 10mL缓冲液(〕混合后在 30℃下分别固定 1、2、3、4、5、7h，测定不同吸附时间下的固定化率和相对酶活力。随着吸附时间的延长，载体的固定化率在增大，在 h后根本到达平衡，吸附刚起先时，载体上的吸附位点许多，传质的驱动力大，吸附快速。吸附时间超过后，相对酶活力起先下降，因为酶分子在载体上起先积聚，影