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细胞的原代培养实验报告.pdf

文档介绍

文档介绍:实验 十一 细胞的原代培养
一、实验目的
1、了解细胞体外培养的原理、基本方法。
2、掌握无菌操作方法及注意事项。
3、学习观察体外培养细胞的形态及生长状况。
二、实验原理
模仿体内生长环境,使来实验 十一 细胞的原代培养
一、实验目的
1、了解细胞体外培养的原理、基本方法。
2、掌握无菌操作方法及注意事项。
3、学习观察体外培养细胞的形态及生长状况。
二、实验原理
模仿体内生长环境,使来自机体的细胞、组织、器官能够在人工培养条件下生存、
生长、繁殖。
三、实验器材
1、纯水设备:纯水仪
2、干燥消毒设备:电热干燥箱、高压蒸汽消毒锅、过滤器及 m 滤膜;
3、超净工作台
4、培养设备: 普通培养箱、CO2 培养箱;
5、贮存设备:冰箱、液氮罐
6、观察设备:倒置显微镜
7、其他设备:天平、离心机、水浴锅等
培养主要用品
1、培养瓶、皿:以玻璃器皿为主 ,应选择透明度好、无毒、中性硬度玻璃制品
(1)培养瓶
(2)培养皿
2、血球计数板
3、眼科剪、镊;
实验材料
7-14 日龄鸡胚
(肝素)抗凝血
原代培养材料选择
幼体组织(尤其是胚胎组织)比成年个体的组织容易培养
分化程度低的组织比分化高的容易培养
肿瘤组织比正常组织容易培养。
实验试剂
1、D’Hanks 液
KH2PO4 ,NaCl ,NaHCO3 ,KCl ,葡萄糖 ,
Na2HPO4•H2O ,加 H2O 至 1000ml
注:Hank’s 液可以高压灭菌。4℃下保存。
2、o.25%胰蛋白酶( D’Hanks 液配)
3、M199 培养液
4、 小牛血清5、青、链霉素
6、5%NaHCO3、 2%碘酒
7、75%酒精
8、洗液:由重铬酸钾、浓硫酸和蒸馏水按一定比例配制而成
四、实验方法与步骤
一)培养前的准备工作
1、用品清洗与消毒
2、溶液配制与消毒
(1) 培养液、酶、抗生素等生物活性成分需过滤消毒
(2)平衡盐等高压蒸汽消毒
3、 预热溶液
4、 工作间及超净台消毒:紫外线、消毒液。
5、 洗手和着装
6、 进入无菌室
7、关闭超净工作台内的紫外光灯,点燃酒精灯(一切操作均需在酒精灯火焰下进行)
将消毒过的所用物品放入超净工作台中
组织块培养法培养鸡心肌细胞步骤
1、配 M199 完全培养液:
M199 基础培养液 90%
小牛血清 10%
青霉素 100IU/ml
链霉素 100 g/ml
过滤除菌。
2、获取心脏
① 消毒鸡胚蛋:泡入 70%酒精