文档介绍：实验十一细胞的原代培养
一、实验目的
1、了解细胞体外培养的原理、基本方法。
2、掌握无菌操作方法及注意事项。
3、学习观察体外培养细胞的形态及生长状况。
二、实验原理
模仿体内生长环境，使来实验十一细胞的原代培养
一、实验目的
1、了解细胞体外培养的原理、基本方法。
2、掌握无菌操作方法及注意事项。
3、学习观察体外培养细胞的形态及生长状况。
二、实验原理
模仿体内生长环境，使来自机体的细胞、组织、器官能够在人工培养条件下生存、
生长、繁殖。
三、实验器材
1、纯水设备：纯水仪
2、干燥消毒设备：电热干燥箱、高压蒸汽消毒锅、过滤器及 m 滤膜；
3、超净工作台
4、培养设备：普通培养箱、CO2 培养箱；
5、贮存设备：冰箱、液氮罐
6、观察设备：倒置显微镜
7、其他设备：天平、离心机、水浴锅等
培养主要用品
1、培养瓶、皿：以玻璃器皿为主，应选择透明度好、无毒、中性硬度玻璃制品
（1）培养瓶
（2）培养皿
2、血球计数板
3、眼科剪、镊；
实验材料
7－14 日龄鸡胚
（肝素）抗凝血
原代培养材料选择
幼体组织（尤其是胚胎组织）比成年个体的组织容易培养
分化程度低的组织比分化高的容易培养
肿瘤组织比正常组织容易培养。
实验试剂
1、D’Hanks 液
KH2PO4 ，NaCl ，NaHCO3 ，KCl ，葡萄糖，
Na2HPO4•H2O ，加 H2O 至 1000ml
注：Hank’s 液可以高压灭菌。4℃下保存。
2、o．25％胰蛋白酶（ D’Hanks 液配）
3、M199 培养液
4、小牛血清5、青、链霉素
6、5％NaHCO3、 2％碘酒
7、75％酒精
8、洗液：由重铬酸钾、浓硫酸和蒸馏水按一定比例配制而成
四、实验方法与步骤
一）培养前的准备工作
1、用品清洗与消毒
2、溶液配制与消毒
（1）培养液、酶、抗生素等生物活性成分需过滤消毒
（2）平衡盐等高压蒸汽消毒
3、预热溶液
4、工作间及超净台消毒：紫外线、消毒液。
5、洗手和着装
6、进入无菌室
7、关闭超净工作台内的紫外光灯,点燃酒精灯(一切操作均需在酒精灯火焰下进行)
将消毒过的所用物品放入超净工作台中
组织块培养法培养鸡心肌细胞步骤
1、配 M199 完全培养液：
M199 基础培养液 90％
小牛血清 10％
青霉素 100IU/ml
链霉素 100 g/ml
过滤除菌。
2、获取心脏
① 消毒鸡胚蛋：泡入 70％酒精