文档介绍：细胞生物学细胞融合实验
细胞融合因素的探讨
——时间对细胞融合的影响 〔实验目的〕
1、 了解细胞融合的原理
2、 掌握PEG介导细胞融合过程的操作
3、 通过实验,探讨影响细胞融合的因素(温度,时间,细胞密度,酸碱度,P细胞生物学细胞融合实验
细胞融合因素的探讨
——时间对细胞融合的影响 〔实验目的〕
1、 了解细胞融合的原理
2、 掌握PEG介导细胞融合过程的操作
3、 通过实验,探讨影响细胞融合的因素(温度,时间,细胞密度,酸碱度,PEG浓度) 〔实验原理〕
1、聚乙二醇(PEG)分子能使细胞凝集，改变各类细胞的膜结构，使两细胞接触点处的细胞膜脂类分子发生疏散和重组，由于两细胞间接口处双分子层质膜的相互亲和以及彼此的表面张力作用，使细胞发生融合。
2、显微镜直接计数是通过测定血细胞计数板的计数室内微生物细胞的数量来进行快速计数。应用血细胞计数板在显微镜下直接计算血细胞的数量，方法是先测定若干个方格中的血细胞数量，再换算成每mL(或每g样品)中血细胞的数量。
(1)25×16型计数板:设五个中方格中的血细胞总数为A，血细胞稀释度为B，则计数室的血细胞总数为(A/5)×25×B.
33因为1mL=1000mm， mm，故:
血细胞浓度=(A/5)×25×10×1000×B=50000A×B(个/mL)
(2)16×25型计数板:设四个中方格中的血细胞总数为A′，则:
血细胞浓度=(A′/5)×25×10×1000×B=50000 A′×B(个/mL) 〔试剂材料〕
1、仪器:显微镜、水浴锅
2、试剂
(1) %生理盐水
(2) GKN液
NaCl 8g, KCl , , NaHPO. HO , 葡萄糖2g，，242242
溶于1000ml重蒸水中。
(3) 50%PEG液
临用前配制，10g PEG4000，在沸水浴中加热，冷却至50?时加入预热至50?的10ml GKN
液，混匀，37?备用。
3、材料:红细胞悬液(鸡血)
〔内容方法〕
1、 抗凝的血，%生理盐水，为血细胞储备液，4?冰箱可保存一周 2、 血储备液1ml，加入4ml生理盐水，混匀后1200r/min离心5min，去上清，再加入生理
盐水同样条件下离心一次。血细胞沉淀加入10mlGK