文档介绍：免疫荧光实验步骤
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1. 直接免疫荧光法测抗原
* _4 Q9 A+ c3 Q: w   s: N(1)基本原理, R$ X4 }! `( ^1 J
将荧光素标记在相应的抗体上,直接与相应抗原反应。其优点是方法简便、特异性高,非特异性荧光染色少。缺点是敏感性偏低;而且每检查一种抗原就需要制备一种荧光抗体。此法常用于细菌、病毒等微生物的快速检查和肾炎活检、皮肤活检的免疫病理检查。8 J( W# I4 O& E/ o2 P
(2)试剂与仪器
5 Y2 ?3 [$ T( a* gl       磷酸盐缓冲盐水(PBS):,' P7 W) S7 C; Y' f8 |0 }! O- W
      荧光标记的抗体溶液:,
8 R7 a; q7 p5 o1 `       缓冲甘油:分析纯无荧光的甘油9份+ # t3 j8 g! p* W7 X) g$ F
      搪瓷桶三只(, 1500ml)l1 D) @& |) ~5 h0 G   C
      有盖搪瓷盒一只(内铺一层浸湿的纱布垫)l
3 {7 b% d# x6 N& A+ A7 g. o/ w: O       荧光显微镜l# l: f' X; m+ x! |% Q
      玻片架l
" G8 o2 ~1 W+ M3 s) _   B       滤纸l
% J! b+ F1 F/ |' v   vl       37℃温箱等。* r9 U" [, H) b* ]3 W4 q
(3)实验步骤0 Y   z+ {! O! R9 x2 Y2 X: D
①,,10min后弃去,使标本保持一定湿度。6 R, B6 X/ Y5 `5 e; P
②滴加适当稀释的荧光标记的抗体溶液,使其完全覆盖标本,置于有盖搪瓷盒内,保温一定时间(参考:30min)。* `+ R6 J   g. g
③取出玻片,置玻片架上,,,,,每缸3-5 min,不时振荡。
) s5 @& L% \' A$ M( [) @ ④取出玻片,用滤纸吸去多余水分,但不使标本干燥,加一滴缓冲甘油,以盖玻片覆盖。) O9 A   {# N. F" }
⑤立即用荧光显微镜观察。观察标本的特异性荧光强度,一般可用“+”表示:" M9 d6 j- ~. S: ^1 n
(-)无荧光;(±)极弱的可疑荧光;(+)荧光较弱,但清楚可见;(++)荧光明亮;(+++ --++++)荧光闪亮。待检标本特异性荧光染色强度达“++”以上,而各种对照显示为(±)或(-),即可判定为阳性。
6 q& {% p/ r   [' b* V(4)注意事项
% C# U2 v$ M9 ~$ W& W 1)对荧光标记的抗体的稀释,要保证抗体的蛋白有一定的浓度,一般稀释度不应超过1:20,抗体浓度过低,会导致产生的荧光过弱,影响结果的观察