实验十一 血清ALT测定.docx

文档介绍：实验十一血清ALT测定（赖氏法）
【目的】
了解血清ALT活性测定的原理及测定方法。
掌握血清ALT活性测定的临床意义。
【原理】
丙氨酸与a-***戊二酸在丙氨酸氨基转移酶（ALT）的作用下生成***酸和谷氨酸。在反应到达规定时间时，
实验十一血清ALT测定（赖氏法）
【目的】
了解血清ALT活性测定的原理及测定方法。
掌握血清ALT活性测定的临床意义。
【原理】
丙氨酸与a-***戊二酸在丙氨酸氨基转移酶（ALT）的作用下生成***酸和谷氨酸。在反应到达规定时间时，加入2，4-二硝基苯肼-盐酸溶液以终止反应。生成的***酸与2，4-二硝基苯肼作用，生成***酸2，4-二硝基苯腙。后者在碱性条件下显棕红色。根据颜色的深浅，求得血清中丙氨酸氨基转移酶的活力。反应式如下：
COOH
cH3
C二0
COOH
***酸
cH3
hcnh2
COOH
CH2cH2COOH
ALT
H3
：_-O
COOH
(hnh2
＋
2，4-二硝基苯肼
NaOH-
COOH
-H2O
***酸-2，4-二硝基苯腙（红棕色）
CH2cH2
COOH
器材】
试管、刻度吸管、恒温水浴箱、分光光度计。
试剂】
（）称取磷酸氢二钠（NaHPO，AR），磷酸
24
二氢钾（KHPO，AR）,加少量蒸馏水溶解并稀释至1000ml。
24
ALT底物液称取a-***,，,煮沸溶解后冷却，用1mol/（）,，混匀，加***仿数滴，置冰箱可保存数周。
***酸标准液（2pmol/ml）精确称取***酸钠（AR）,
。
,4-二硝基苯肼溶液称取2,4-，用10mol/L盐酸10ml溶解后，加蒸馏水至100ml,置棕色瓶内，冰箱保存。
，然后稀释至1000ml。
【操作】
取2支试管按下表操作：
表3-15血清ALT测定（赖氏法）操作步骤
加入物（ml）
测定管
对照管
血清


ALT底物液

－
混匀，置37oC水浴，保温30分钟
2，4－二硝基苯肼


ALT底物液
－

混匀，置37oC水浴，保温20分钟



混匀，静置10分钟，用505nm波长比色，以蒸馏水调零，读取各管吸光度，用测定管吸光度值减去对照管吸光度值，查标准曲线得ALT活力单位。
【标准曲线绘制】
见下表：
表3-16血清ALT测定（赖氏法）标准曲线绘制操作步骤
加入物（ml）
管
号
0
1
2
3
4
5
***酸标准液（2^mol/ml）
0





ALT底物液



0