文档介绍：第7章蛋白质的分离、纯化和表征 p290
一、蛋白质的酸碱性质
二、蛋白质分子的大小与形状
三、蛋白质的胶体性质与蛋白质的沉淀
四、蛋白质分离纯化的一般原则
五、蛋白质的分离纯化方法
六、蛋白质的含量测定与纯度鉴定
一、蛋白质的酸碱性质
蛋白质分子由氨基酸组成,在蛋白质分子中保存着游离的α-氨基和α-羧基及侧链上的各种功能团,所以其物理化学性质有些与氨基酸相同。
蛋白质也是一类两性电解质,能和酸或碱发生作用。在蛋白质分子中,可解离基团主要来自侧链上的功能团,这些基团能解离为带电基团,从而使蛋白质带电荷。
在酸性情况下,蛋白质中的各碱性基团接受质子,使蛋白质带正电荷;
在碱性情况下,蛋白质中的各酸性基团解离出质子,使蛋白质带负电荷。
在某一pH值时,白质所带的正电荷与负电荷恰好相等,即净电荷为零,此时溶液的pH值就是蛋白质的等电点。
每种蛋白质都有它特有的等电点,这也是鉴别蛋白质的指标之一。
等电点和蛋白质分子中所含氨基酸的种类有关
中性碱性酸性。
蛋白质的酸性氨基酸和碱性氨基酸含量
与等电点的关系
蛋白质
酸性氨基酸
每摩尔残基数
碱性氨基酸
每摩尔残基数
碱性/酸性
等电点
37
胃蛋白酶
6
血清蛋白
血红蛋白
核糖核酸酶
82
99
53
88
7
20
三、蛋白质的胶体性质 与蛋白质的沉淀
(一)蛋白质的胶体性质
(二)蛋白质的沉淀
(一)蛋白质的胶体性质
蛋白质是高分子化合物,由于相对分子质量大,它在水溶液中所形成的颗粒具有胶体溶液的特征如布朗运动、丁道尔现象、电泳现象,不能透过半透膜以及具有吸附能力等。
利用蛋白质不能透过半透膜的性质,可用羊皮纸、火棉胶、玻璃纸等来分离纯化蛋白质,这个方法称为透析法。
蛋白质溶液是胶体溶液(如血清、蛋清)
胶体条件:
:1-100nm
:表面有许多极性、亲水基团
(-NH3、-COOH、-OH、-SH、-CONH2等)。
(同性相斥)
(二)蛋白质的沉淀反应
如果在蛋白质溶液中加入适当的试剂,破坏了蛋白质的水膜或中和了蛋白质的电荷,则蛋白质胶体溶液就不稳定而出现沉淀现象。
蛋白质可因加入下列试剂而产生沉淀。
1、加高浓度盐类
2、加有机溶剂
3、加重金属盐
4、加某些酸类或生物碱试剂
5、加热变性沉淀
加高浓度盐类
硫酸铵、硫酸钠、氯化钠等可以破坏蛋白质胶体周围的水膜,同时又中和了蛋白质分子的电荷,因此使蛋白质产生沉淀,这种加盐使蛋白质沉淀析出的现象,称为盐析。盐析法是分离制备蛋白质的常用方法。
根据各种蛋白质的颗粒大小、亲水性的程度不同,在盐析时需要盐的浓度也不一致。因此,这种调节中性盐的浓度使蛋白溶液中的几种蛋白质分段析出的方法称分段盐析法。
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加有机溶剂
酒精、丙酮等可使蛋白质产生沉淀,这是由于这些有机溶剂和水有较强的作用,破坏了蛋白质分子周围的水膜,因此发生沉淀反应。
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