文档介绍：细胞生物学杂志
细胞生物学杂志
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细胞生物学杂志 C hi nese Journal of Cell Biology 2004, 26: 429- 432
大肠杆菌感受态细胞转化能力的影响因素
张岚岚徐春燕徐昌杰*
( 浙江大学园艺系, 农业部园艺植物生长发育与生物技术重点开放实验室, 杭州、 1 3 10 029)
细胞生物学杂志细胞生物学杂志
细胞生物学杂志摘要探讨了大肠杆菌菌林、细菌生长状态、转化溶液、抗冻剂及保存时间、质粒长度和
纯度对感受态细胞转化能力的影响。结果表明,以 100 mmol/L CaC1 2 为缓冲液,采用经活化培养
的 A制为 0 .55 的 TGl 制备的感受态细胞,细胞生物学杂志在冰上放直 6h 后转化,所得转化率最高, 可达 2xl0 6 -4 x 107 细胞生物学杂志
细胞生物学杂志 c fulμg DN A(pUC I9 ) 。随着质粒长度增加和纯度降低, 转化率有所下降。若感受态细胞要保存备
用,以 15 % 甘油为抗冻剂优于 7 % DMSQ , 但添加抗冻剂对转化率有抑制作用。贮于甘油的感受
态细胞在-7 0 'C 凉存两个月后仍有较理想的转化率。
关键词大肠杆菌: 感受态细胞: 转化能力
感受态细胞的制备和转化是分子生物学实验室对感受态细胞转化率的影响, 也对感受态细胞在不
频繁使用的一项重要的常规操作,可用于基因克隆同的冻存条件下转化率的维持情况进行研究。旨在
以及文库构建等研究。通常文库构建需要相当高转通过各方面因素的综合比较, 获得一个最佳应用方
细胞生物学杂志化率的感受态细胞,而基因克隆操作对感受态细胞案。
的转化率要求相对较低。然而, 当用于转化的质粒细胞生物学杂志细胞生物学杂志
细胞生物学杂志 DNA ( 通常是连接产物) 量比较少, 特别是同时质粒 1 材料和方法
DNA 长度较长以及连接产物中存在较高含量的杂质
1. 1 材料
细胞生物学杂志时,还是对感受态细胞的转化率有比较高的要求,
. 1 菌林 E. coli TG细胞生物学杂志 1, E. coli DH5α, E. coli
应用感受态不佳的细胞通常导致没有转化菌斑的生细胞生物学杂志
细胞生物学杂志 JMI09 由本实验室保存。
长,从而耽误实验进程。
质粒 DNA 纯 pUC1 9 质粒为 TaKaRa 公司
制备感受态细胞最常用的方法是 CaC1 法, 最理
2 产品。 pUC19 质粒和 pB I1 21 质粒碱法[1] 提取。
想时转化率可达 5x10 6 -2 x l 0 7 cfulμgDNA [I],然而,在
1. 2 方法
实际操作中我们发现转化率常低于 10 5 , 甚至曾低达
感受态细胞制备与转化标准方案的步骤①
3x l 0 \ 从而不能满足实验的要求。尽管 CaC1 法应
2 选用 TGl 菌株: ②从 LB 平板上挑取新活化的单菌
用十分普遍,但对影响感受态细胞转化能力的因素
落, 37 'C 下振荡培养过夜。以 1:50 的比例接种到
通常只有经验性的