文档介绍：湖南师范大学
硕士学位论文
蛋白质磷酸化鉴定方法研究及HT1080细胞磷酸化蛋白质组分析
姓名:李水明
申请学位级别:硕士
专业:生物化学与分子生物学
指导教师:陈平;梁宋平
20070501
摘要磷酸化修饰是生物体内最重要的蛋白质翻译后修饰之一,蛋白质化蛋白质的修饰位点是磷酸化蛋白质组学研究的首要任务和关键步骤。论文首先以标准磷酸化蛋白质和合成的磷酸肽为样本建立了一种可靠、简单、快速的蛋白质磷酸化修饰分析的方法:首先利用固相金在对人成纤维肉瘤细胞系姿峄鞍字首榈难芯恐校分类总结,最后对鉴定出的磷酸化蛋白质进行了亚细胞定位和初步的化肽段,质谱,固相金属亲和色谱的可逆磷酸化过程是真核细胞生命活动最普遍的调控手段,确定磷酸属亲和色谱的方法富集样品中的磷酸肽,采用磺基异硫氰酸苯酯ㄖ拇油凡庑虿呗越岷螹—疶质谱进行磷酸化肽及磷酸化位点鉴定,探讨了酪氨酸磷酸化和丝氨酸磷酸化肽的特征图谱,总结了能用于鉴定不同磷酸化修饰类型肽的特征信号离子信息。用固相金属亲和磁珠富集磷酸肽结合瓺甌仃质谱分析,成功地在人成纤维肉瘤细胞样本中鉴定了段磷酸肽,个磷酸化位点,分别归属于磷酸化蛋白质。并对磷酸化肽段的质谱行为做了功能分类分析,建立了对生物样品中蛋白质磷酸化的分析方法。关键词:磺基异硫氰酸苯酯鞍字首椋姿峄坏悖姿Ⅲ
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缩写表杏⑽亩哉姒骼她乙腈甲叉双丙烯酰胺,一】—一碰撞诱导解离—双蒸水双向电泳电喷雾质谱碘乙酰胺同位素标记亲和标签固相梯度液相质谱基质辅助激光解吸飞行时问质谱串联质谱非离子去垢剂聚丙烯酰胺凝胶电泳磷酸盐缓冲液过硫酸胺胆酰胺丙基欢野凡繁撬二硫苏糖醇乙二胺四乙酸等电聚焦猟痠鱢,籇舀
奄婚—褥肽质量指纹图噼聚偏二氟乙烯每分钟转数反相高效液相色谱四级杆时间飞行质谱髓三丁基磷四甲基乙二胺,琋琋三氟乙酸三羟基甲基氨基甲烷蛋白酶抑制剂源后裂解十二烷基硫酸钠—Ⅱ~
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。体中具有十分重要的作用。人类基因组计划的完成是世纪最伟大的科技成果之一,在对人类基因组进行仔细研究后发现。人类基细胞的许多生理功能,例如细胞对外界环境的应答彩峭ü的蛋白质翻译后修饰来实现的。人类生命过程的复杂性不单是基因直接表达的结果,正是蛋白质翻译后修饰,使得一个基因并不只对应在真核动物细胞中有多种蛋白质翻译后修饰过程,常见的有磷酸化、糖基化、泛素化、脂基化、甲基化和乙酰化等。近年来,,对蛋白质蛋白质翻译后修饰在生命倍。而生命体内复杂生命过程的调控。仅仅靠这样小数目的基因远不能满足需要,因此。蛋白质翻译后修饰过程尤为重要,它使蛋白质的结构更为复杂,功能更为完善,调节更为精细,作用更为专一。细胞内许多蛋白质的功能,是通过动态的蛋白质翻译后修饰来调控的;一个蛋白质。,关于蛋白质翻译后修饰的研究也取得一系列进展。蛋白质磷酸化鉴定方法研究及细胞磷酸化蛋白质组分析
掣刀研究了脊椎动物蛋白激酶呋ㄓ米B家蜃覶特定位点上的过程。大部分细胞过程实际上是被可逆的蛋白磷酸化所调控的,至少有%的蛋白被磷酸化修饰【A姿峄淖饔梦坏功能都发生改变。可逆的磷酸化过程几乎涉及所有的生理及病理过及细胞的增殖、发育和分化等。和蚱湓诘鞍字士赡媪及医学奖。在细胞信号转导过程中。作为细胞信号的一些激素或细胞在癌症研究中发现,微管蛋白的磷酸化可能导致癌症的发生。细胞中使用“最后检验点策略”刂葡赴蛲觥<唇ê邢趸酪氨酸的⒐艿鞍鬃樽暗轿⒐苌稀U饨ǖ贾挛⒐芄δ苁С6钪导致细胞凋亡。但如果微管蛋白酪氨