文档介绍：星多,签字日期:锣\年月沙日学位论文作者签名治::学位论文作者签名中:箜盏觑学位论文版权使用授权书其他人已经发表或撰写过的研究成果,也不包含为获得直昌盔堂或其他教育本学位论文作者完全了解直昌太堂有关保留、使用学位论文的规定,有权阅。本人授权直昌太堂可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行签字日期:钞吖年‘月矗本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知,除了文中特别加以标注和致谢的地方外,论文中不包含机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。年‘月咳保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘,允许论文被查阅和借检索,可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编本学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所和中国学术期刊馀贪电子杂志社将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》和《中国优秀博硕士学位论文全文数据库》中全文发表,并通过网络向社会公众提供信息服务。C艿难宦畚脑诮饷芎笫视帽臼谌ㄊ导师签名中:
㈨\摘要痢疾杆菌是一种革兰氏阴性病原菌,通过各种分泌系统将毒力蛋白分泌到外部环境或者直接注入宿主细胞。迄今已经发现偷絍凸擦掷嘈头置谙统,都是由单个蛋白或者大分子复合物形成一个跨越细菌细胞膜的通道。由于膜蛋白复合物结构复杂、疏水性强,难以从疏水的细胞膜脂双层中完整地分离纯化,因此长期以来对其研究局限于将可能的结构蛋白一个个单独进行结构和功能研究,缺乏整体性。近年来由等人建立并逐渐成熟的蓝色非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳为复合物研究带来新的突破。在痢疾杆菌的致病过程中,毒力大质粒编码许多侵袭相关蛋白比如头置谙低掣春衔锛捌浞置诘亩玖σ蜃樱娜笔Щ岬贾痢疾杆菌毒性的丧失。其细胞膜上除头置谙低掣春衔镏猓唤龌褂种类型分泌系统复合物未被分离鉴定,还可能有其它一些完全未知的复合物。本研究通过蓝色非变性凝胶电泳:航狭〖哺司J型野生株和大质粒缺失株哪さ鞍赘春衔铮⑾忠桓鲆吧晏赜械母春物,其分子量约为,命名为。通过第二向狿掷得到龅鞍籽腔势准ㄎ#阂桓鲇纱笾柿1嗦氲亩玖Φ鞍姿崴饷和鋈旧灞嗦氲牡鞍祝直鹞狢。这个复合物是通过染色体和毒力大质粒的共同调控来实现的致病性。鉴定出复合物的组成蛋白后,决定用标签亲和纯化技术对复合物的组成进行了验证。将谋嗦牖騪插入表达昵┑腜一靥澹构建成功瓽融合表达载体,转入中,命名为猘;制备该转化菌的膜蛋白复合物样品,用谷胱甘肽转移酶亲和柱纯化含昵┑’蛋白,利用分离纯化产物。结果没有分离得到诤系鞍参与形成的复合物。分析可能是昵┍旧矸肿恿勘冉洗螅谋淞薬的三维结构导致无法形成复合物。于是将谋嗦牖騪插入到更小的表达昵┑腜体中,构建成功瓾融合表达载体,转入中,、
诱导表达后超声破碎裂解细菌收集上清,发现在上清中有融合蛋白。然后利用镍柱进行亲和纯化,纯化得到瓾融合蛋白。本实验构建的融合载体和纯化的融合蛋白为以后的复合物的验证奠定基础。同时为了对隡春衔锏墓δ芙谐醪教剿鳎肦重组系统敲除中谋嗦牖騪。成功构建了线性打靶片段。把线性打靶片段转入含重组酶系统的感受态细胞中,通过卡纳霉素抗性标记筛选发生重组的缺失突变株。可能是由于重组效率低,目前还在筛选发生有效重组的缺失突变株。关键词:痢疾杆菌;膜复合物;.;腺苷三磷酸双磷酸酶;亲和纯化;刈橄低场摘要Ⅱ
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录目第滦髀邸志贺氏菌属的概述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·志贺氏菌属与大肠杆菌的进化关系⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯志贺氏菌感染细胞的过程⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·志贺氏菌疫苗的研究进展⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯≡⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·研究膜蛋白的几种双向电泳技术的比较⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·本课题的研究意义及研究现状⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一本研究的目的和技术路线⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯分离膜复合物和质谱检测结果⋯⋯⋯⋯⋯讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·第吕肎标签亲和纯化技术验证复合物的亚基组成⋯⋯..
结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯