文档介绍：维普资讯
/了一了
第卷第期广西农业大学学报年月
.。. :
水稻白叶枯病黄单胞菌赖氨酰一
合成酶基因的定位、克隆及分析
奚传武冯家勋唐纪良
广西农业大学实验中心分子遗传学研究室,南宁
默
关键词堕直属;潋堕鳗⋯泌皇莹⋯标记置⋯换致一死采变爿彳, 声
中图分娄号.., ‘
长期以来,水稻自叶枯病是全球水稻栽培区特别是亚洲地区危
害性非常严重的细菌性病害,该病是由水稻白时枯病黄单胞苗。唧.
以下简称引起的。随着现代分子生物学技术的发展,已经鉴定和克隆到不少与
致病有关的基因,为从分子水平上探索其致病机理,利用生物防治根除其病害起到很大的推
动作用。等。从甘蓝黑腐病黄单胞菌野生型基因文库中,筛选到含有一簇致病因子调
控基因基因的克隆唐纪良等;从水稻白叶枯病黄单胞苗中,克隆到含一簇与
甘蓝黑腐病黄单胞菌致病因子调控基因同源的致病因子调控基因印基因的克隆一
。其中基因编码的产生属于普遍存在的“双组份调控系统”—
家族的成员“。奚传武等构建了基因部分缺失突变株,在水稻白叶枯病
生物控制的研究中作一定的探索待发表。但从目前的文献看,研究该病菌生理过程相关的
其他基因很少有报道。
在大肠杆菌中,每个特异的氨酰一合成酶催化特异的氨酰一合成,就目前所知
只有赖氨酰一的合成是由两/卜合成酶催化的。这两个赖氮酰合成酶分别是位于大
肠杆菌—连锁图中大约和的基因和的产物。这两个不相连
的基因大约有的同源性,具有共同的祖先,包括在内的编码氨酰一合成酶基因
是组成型表达的。因为他们在蛋白质合成中是必需的,而的表达是受一定的条件如果
糖或高温等诱导的。
冯家勋等已在甘蓝黑腐病黄单胞茁中鉴定到与大肠杆菌赖氨酰一合成酶基因同源
的基因。该基因在甘蓝黑腐病黄单胞菌中只有一个拷贝即相当大肠杆菌基因,该基因与
大肠杆菌具备同源性私人交流。本研究即是以甘蓝黑腐病黄单胞茁为探针
定位了中同功的基因并克隆了该基因,初步确定中也只有一个赖氨酰一合成酶
国家高技术计划项目
啦稿日期: 一一。
维普资讯
广西农业大学学报第卷
基因,该基因失活对是致死的。
材料和方法
. 供试菌株及质粒
所用的菌株和质粒及其特征列于表。
丧供试菌株、质粒的来源和特征
. 培养基和培养条件
水稻自叶枯病黄单胞菌的培养基为冯家勋根据文献改进,培养温度为℃;大肠杆
菌的培养基为,培养温度为℃;抗生素使用浓度为:卡那霉素/、链霉
素//、四环素/ 大肠杆菌、四环素/ 黄单胞
菌。
. 提取
水稻自叶枯病黄单脆菌、大肠杆菌的提取按文献述的方法进行,少量质粒的
提取按照文献方法。
. 体外操作
限制性内切酶酶解、琼脂糖凝胶电泳分析、连接、转移、—撩
针制备、—杂交均按照文献的方法
结果与分析
. 水稻白叶枯病黄单胞菌中与同源的序列验证
提取水稻自叶枯病黄单胞菌野生型菌株的总和质粒,经限制性核
维普资讯
第期奚传武等:水稻白叶枯病黄单胞菌赖氨酰一合成酶基固的定位、克隆及分析
酸内切酶酶解,琼脂糖凝胶电泳分离和转移到尼龙膜后,以标记的含
—杂交,放射性
自显影结果表明,水稻白叶枯病黄