文档介绍：该【植物组织中总糖及还原糖的测定 】是由【闰土】上传分享，文档一共【12】页，该文档可以免费在线阅读，需要了解更多关于【植物组织中总糖及还原糖的测定 】的内容，可以使用淘豆网的站内搜索功能，选择自己适合的文档，以下文字是截取该文章内的部分文字，如需要获得完整电子版，请下载此文档到您的设备，方便您编辑和打印。实验一
植物组织中总糖及还原糖的测定
—3,5-二硝基水杨酸比色法
学时:3
植物组织中总糖及还原糖的测定共12页,您现在浏览的是第1页!
1、掌握还原糖和总糖测定的基本原理。
2、掌握比色法测定还原糖的操作方法。
一、实验目的:
植物组织中总糖及还原糖的测定共12页,您现在浏览的是第2页!
1、还原糖:指含有游离的半缩醛(***)基糖。
单糖都是还原糖;某些二糖是还原糖(如麦芽糖、乳糖等);多糖为非还原糖。
2、总糖的提取及双、多糖的酸水解。
利用糖的溶解度不同,可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来,对没有还原性的双糖和多糖,可用酸水解法使其降解成有还原性的单糖进行测定,再分别求出样品中还原糖和总糖的含量(还原糖以葡萄糖含量计)。
二、实验原理:
植物组织中总糖及还原糖的测定共12页,您现在浏览的是第3页!
3、在一定范围内,还原糖的量与棕红色物质(3-氨基-5-硝基水杨酸)颜色的深浅成正比关系,利用分光光度计,在540nm波长下测定光密度值,查对标准曲线并计算,便可求出样品中还原糖的含量。
由于多糖水解为单糖时,每断裂一个糖苷键需加入一分子水,。
植物组织中总糖及还原糖的测定共12页,您现在浏览的是第4页!
四、实验步骤:
1、葡萄糖标准曲线的绘制
2、还原糖的提取
3、样品含糖量的测定:
植物组织中总糖及还原糖的测定共12页,您现在浏览的是第5页!
2、还原糖的提取
,加水2-3ml,充分研磨。
用2-3ml蒸馏水分三次冲洗研钵(总体积小于10ml),转入试管中。
在50℃水浴中恒温20分钟,冷却后于3000转离心5分钟。
取上清转入试管中,用蒸馏水定容20毫升,待测。
植物组织中总糖及还原糖的测定共12页,您现在浏览的是第6页!
还原糖含量(μg/g)=
五、计算:
还原糖含量χ1(μg)×样液总体积
测定用样品液体积×样品鲜重(g)
总糖含量(μg/g)=
水解后还原糖含量(μg)×样液总体积×
测定用样品液体积×样品鲜重(g)
植物组织中总糖及还原糖的测定共12页,您现在浏览的是第7页!
2、还原糖与3,5-二硝基水杨酸(DNS)试剂反应:
在碱性条件下,还原糖与DNS试剂反应,还原糖被氧化成糖酸及其它产物,DNS被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。
3-氨基-5-硝基水杨酸
(棕红色,A540)
3,5-二硝基水杨酸
(DNS)
植物组织中总糖及还原糖的测定共12页,您现在浏览的是第8页!
1、实验材料:苹果()
2、仪器:水浴锅;可见分光光度计等。
3、试剂:
(1)1mg/mL葡萄糖标准液
(2)3,5-二硝基水杨酸(DNS)试剂(碱性)
(3)6MHCl和6MNaOH
三、实验材料、仪器和试剂:
植物组织中总糖及还原糖的测定共12页,您现在浏览的是第9页!
1、葡萄糖标准曲线的绘制: 取7支试管,按下表操作,以标准葡萄糖含量为横坐标,对应的吸光值为纵坐标,绘制标准曲线。
管
号
葡萄糖
标准液
mL
蒸馏水
mL
DNS
mL
沸水
浴
光密度值
OD540nm
葡萄糖含
量(μg)
0(参比溶液)
0
1
5min
冷却
0
1
200
2
400
3
600
4
800
5
0
1000
χ1
还原糖提取液
蒸馏水
mL
4
植物组织中总糖及还原糖的测定共12页,您现在浏览的是第10页!