文档介绍：实验一
植物组织中总糖及还原糖的测定
—3,5-二硝基水杨酸比色法
学时:3
1、掌握还原糖和总糖测定的基本原理。
2、掌握比色法测定还原糖的操作方法。
一、实验目的:
1、还原糖:指含有游离的半缩醛(***)基糖。
单糖都是还原糖;某些二糖是还原糖(如麦芽糖、乳糖等);多糖为非还原糖。
2、总糖的提取及双、多糖的酸水解。
利用糖的溶解度不同,可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来,对没有还原性的双糖和多糖,可用酸水解法使其降解成有还原性的单糖进行测定,再分别求出样品中还原糖和总糖的含量(还原糖以葡萄糖含量计)。
二、实验原理:
2、还原糖与3,5-二硝基水杨酸(DNS)试剂反应:
在碱性条件下,还原糖与DNS试剂反应,还原糖被氧化成糖酸及其它产物, DNS被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。
3-氨基-5-硝基水杨酸
(棕红色,A540)
3,5-二硝基水杨酸
(DNS)
3、在一定范围内,还原糖的量与棕红色物质(3-氨基-5-硝基水杨酸)颜色的深浅成正比关系,利用分光光度计,在540nm波长下测定光密度值,查对标准曲线并计算,便可求出样品中还原糖的含量。
由于多糖水解为单糖时,每断裂一个糖苷键需加入一分子水,。
1、实验材料:苹果( g)
2、仪器:水浴锅;可见分光光度计等。
3、试剂:
(1)1 mg/mL葡萄糖标准液
(2)3,5-二硝基水杨酸(DNS)试剂(碱性)
(3)6M HCl和6M NaOH
三、实验材料、仪器和试剂:
四、实验步骤:
1、葡萄糖标准曲线的绘制
2、还原糖的提取
3、样品含糖量的测定:
1、葡萄糖标准曲线的绘制: 取7支试管,按下表操作,以标准葡萄糖含量为横坐标,对应的吸光值为纵坐标,绘制标准曲线。
管
号
葡萄糖
标准液
mL
蒸馏水
mL
DNS
mL
沸水
浴
光密度值
OD540nm
葡萄糖含
量(μg)
0(参比溶液)
0
1

5min
冷却

0
1

200
2

400
3

600
4

800
5

0
1000

χ1
还原糖提取液
蒸馏水
mL
4
2、还原糖的提取
,加水2-3ml,充分研磨。
用2-3ml蒸馏水分三次冲洗研钵(总体积小于10 ml),转入试管中。
在50℃水浴中恒温20分钟,冷却后于3000转离心5分钟。
取上清转入试管中,用蒸馏水定容20毫升,待测。
3、样品含糖量的测定:
,按上表操作。