文档介绍：生物学导论实验报告
叶绿体色素的提取分离和理化性质
提取与分离
实验目的
学习应用薄层色谱法分离叶绿体色素的实验方法。
实验原理
提取:叶绿体色素为有机酯类化合物,根据相似相容原理,常用有机溶剂提取。如酒精、丙酮、乙酸乙酯、氯仿等。
分离:薄层层析法是将吸附剂均匀的涂抹在玻璃板上形成一薄层,将此吸附剂薄层作为固定相,把待测分离的样品溶液点在薄层板的下端,然后用一定量的溶剂作流动相,将薄层板的下端浸入到展开剂中。流动相通过毛细管作用由下而上逐渐浸润薄层板,并带动样品在板上也向上移动,样品中各组成分在吸附剂和展开剂之间发生连续不断的吸附、脱吸附、再吸附……的过程。由于吸附剂对不同物质的吸附能力大小不同,吸附能力强的物质相对移动慢一些,儿媳妇能力弱的物质相对移动快一些,从而使各组分有不同移动速度而彼此分开。
实验材料与试剂
(1)新鲜的菠菜叶;
(2)体积分数为95%的乙醇,碳酸钙粉末、展开剂
(3)钵体、漏斗、三角瓶、剪刀、点样本、毛细管、层析缸、硅胶预制板、滤纸。
实验步骤
色素提取液的制备
取叶4~5片新鲜叶片,洗净,擦干叶表面,去中脉剪碎,放入钵体中。
加入少量碳酸钙,加2~3ml体积分数为95%的乙醇,研磨至糊状,再加入10ml乙醇,上清液过滤,残渣再用10ml乙醇冲洗过滤。
叶绿体色素的分离
取硅胶预制板一个,用点样毛细管取上述提取液,平行于硅胶板的短边,距下边缘1cm处用毛细管划线,风干,重复操作3~4次;
在干燥的层析缸中加入适量展开剂,,将硅胶预制板带有色素一端放入,使其下端浸入展开剂中;
当色素较好分离,展开剂前沿接近硅胶预制板的上端边缘时,取出,画线。
Rf=斑点中心到原点距离/溶剂前沿到原点距离
实验结果与分析
从上至下为胡萝卜素(橙色):Rf==
叶绿素a(蓝绿色):Rf==
叶绿素b(黄绿色):Rf==
叶黄素(黄色):Rf=.558
可知,胡萝卜素、叶绿素a、叶绿素b、叶黄素极性依次增大,与硅胶吸附能力依次增强。
同时可见其他色素带。
表明叶绿体中色素不限于以上4种。
理化性质
实验目的
验证叶绿素的理化性质。
实验原理
叶绿素是一种有叶绿酸与甲醇形成的复合酯,故可发生皂化反应。
叶绿素化学性质不稳定,见光分解。
叶绿素中的Mg可以被H+取代而形成褐色的去镁叶绿素,去镁叶绿素遇铜则变成
铜带叶绿色。
实验材料与试剂
新鲜菠菜叶片,叶绿素提取液;
刻度试管,小试管,试管架,水浴锅,10ml移液管;
95%乙醇,苯,醋酸铜粉末,5%稀盐酸,醋酸—醋酸铜溶液,氢氧化钠—甲醇溶液。
实验步骤
光对叶绿素的破坏
取两支小试管,体色素提取液,一支放在阳光下,另一支用锡纸包好,40分钟后观察;
取实验一中薄层层析分离成的硅胶色谱板一个,按长度方向将一