PCR技术基因扩展技术.ppt

文档介绍：基因扩增技术--PCR
PCR概述
PCR技术方法
常见PCR类型及应用
摘要
一、PCR概述
定义:PCR技术又称聚合酶链式反应(polymerase
chain reaction),是通过模拟体内 DNA 复制
的方式,在体外选择性地将 DNA 某个特殊区
域扩增出来的技术。
Khorana(1971)等提出在体外经DNA变性,与适当引物杂交,再用DNA聚合酶延伸,克隆DNA的设想。 1983年,Mullis发明了PCR技术,使Khorana的设想得到实现。
1988年Saiki等将耐热DNA聚合酶(Taq)引入了PCR技术。
1989年美国《Science》杂志列PCR 为十余项重大科学发明之首,比喻1989年为PCR爆炸年。
Mullis荣获1993年度诺贝尔化学奖。
PCR历史回顾
生物样品
DNA片段
分子生物学
微生物学
基因工程产品
法医学检测
人类遗传学研究
……
PCR技术诞生所依赖的社会需求和研究需要
二、PCR的技术方法
PCR反应原理
PCR反应条件
PCR条件优化
PCR的影响因素
①模板:单链或双链DNA
②引物:15-30 bp合成的寡核苷酸
③DNA聚合酶:耐热的DNA聚合酶
④底物:四种脱氧三磷酸核苷
(dNTP: dATP、dTTP、dCTP、dGTP)
⑤ Mg2+: DNA聚合酶的激活剂
PCR基本要素
PCR反应条件
总体积 50-100 l
①缓冲液 10 l
②dNTP(底物) 各200mol/L
③引物 10~100pmol
④模板 ~g
⑤DNA聚合酶 l
反应体系
PCR反应条件
模板DNA
95℃
(1)、高温变性
PCR反应原理
PCR的基本原理
PCR反应条件
PCR过程
PCR的特点
50℃
引物1
引物2
DNA引物
PCR反应原理
(2)、低温退火