文档介绍：这是关于DNA重组技术的较好课件
重组DNA技术
重组DNA技术是基因工程的核心技术
获得需要的目的基因(外源基因)
构建重组质粒和基因克隆
转化受体细胞和转化子的筛选
转化子的分析——Southern杂交
重组DNA技术,又称为基因克隆或分子克隆技术,
克隆(clone)---无性繁殖
分子克隆– DNA的无性繁殖技术
重组DNA技术包括了一系列的分子生物学操作步骤。
重组DNA技术的重大突破带动了现代生物技术的兴起,并很快产生了许多生命科学的高技术产业。
重组DNA技术是基因工程的核心技术
基因工程(ic engineering)
所谓基因工程(ic engineering)就是把外源基因通过体外重组后导入受体细胞内,使这个基因能在受体细胞内复制,转录,翻译表达的操作叫基因工程。
基因工程可使另一种生物获得新的遗传性状或表达所需要的产物。
重组DNA操作一般步骤:
(1)获得目的基因;
(2)与克隆载体连接,形成新的重组DNA分子;
(3)用重组DNA分子转化受体细胞,并能在受体细胞中复制和遗传;
(4)对转化子筛选和鉴定;
(5)对获得外源基因的细胞或生物体通过培养,获得所需的遗传性状或表达出所需要的产物。
获得需要的目的基因常用的方法:
(1)直接从生物体中提取总DNA,构建基因组DNA文库(genomic DNA library),从中调用目的基因;
(2)以mRNA为模板,反转录合成互补的DNA片段,建立cDNA文库;
(3)利用聚合酶链式反应(PCR)特异性地扩增所需要的目的基因片段,等等。
(4)化学合成
获得需要的目的基因(外源基因)
细胞内总DNA的提取分离与基因组文库的构建
细胞内总DNA的提取分离程序
苯酚沉淀蛋白质
紫外分光光度计测定DNA溶液的纯度和浓度。
基因组DNA文库的构建
将总DNA经过酶解,经蔗糖梯度离心或琼脂糖凝胶电泳分离不同长短的DNA片段。包含的基因组片段分别克隆在质粒或噬菌体载体上,转染细菌或体外包装到噬菌体颗粒上便构成了该生物的基因组文库。
cDNA文库的构建
mRNA
反转录
cDNA
(互补DNA)
第二条DNA链