文档介绍：脂蛋白和脂质测定方法学评价
血浆脂蛋白和脂质测定是临床生化检验的常规测定项目。
临床意义
☆早期发现与诊断高脂蛋白血症
☆协助诊断动脉粥样硬化症
☆评价动脉粥样硬化疾患如冠心病和脑梗死等
的危险度
☆监测评价饮食与药物治疗效果
血脂、脂蛋白及载脂蛋白测定
目前临床上开展的血脂测定项目包括TC、TG、HDL及其亚类胆固醇、LDL-C、Lp(a)以及部分载脂蛋白如ApoAI、ApoB等。其中TC、TG、HDL-C、LDL-C测定是血脂测定的四个基本指标。血浆4℃冰箱中过夜观察其分层现象及清澈度可初步估计各种脂蛋白的变化状况。血浆脂蛋白电泳结合TC、TG水平有助于高脂血症分型。
概况:
血脂测定标准化:
血脂分析前变异来源于:
①生物因素,如年龄、性别、种族等因素的个体差异。
②生活方式,包括饮食习惯、吸烟、运动及应激等。
③临床方面包括疾病或药物引起的脂代谢改变。
④血标本采集与处理方面
准确测定应从分析前的准备开始,包括受试者的准备,标本
采集,合格的试剂、校准物的选用,检测方法选择。
方法学上应该采用美国疾病控制中心(CDC)或中华医学会检验分会推荐的操作方法。
受试者的准备
采血前2周保持平时的饮食习惯
采血前24小时内不饮酒、不做剧烈运动
嗜烟者(每日超过20支)血清中总胆固醇及甘油三酯水平升高;长期大量饮酒会使血脂升高。
禁食12小时以上
妊娠后期各项血脂都会增高
注意有无应用影响血脂的药物,如降血脂药、避孕药等。
除非是卧床病人,一般在采血时取坐位。体位影响水分在血管内外的分布,会影响测试项目的浓度。
在采血前至少应静坐5分钟,一般从肘静脉取血,使用止血带的时间不超过1分钟,穿刺成功后立即松开止血带。
检测范围

血浆脂质测定(TC TG)
血浆脂蛋白测定(HDL-C LDL-C)
载脂蛋白测定(ApoA ApoB)
血浆脂代谢相关蛋白与酶的测定
脂质相关蛋白基因突变分析
一、血浆脂质测定
(一)总胆固醇测定(化学抽提法、酶法)
1、化学法:
抽提→皂化→洋地黄皂苷沉淀纯化→显色比色
干扰因素多,准确测定有赖于从标本中抽提、皂化、纯化过程,因而操作较繁,不适于分析大批量标本,且不适于自动分析。
2、酶法:胆固醇氧化酶- 过氧化物酶-4-氨基安替比林和酚法
(CHOD-PAP法)
第一反应:生成游离型胆固醇
胆固醇酯+H2O 胆固醇脂酶CHE 游离胆固醇+游离脂肪酸
第二反应:用胆固醇氧化酶(CHOD)和过氧化物酶(POD)作用,诱导生成
醌色素,通过吸光度变化定量测定胆固醇。
游离胆固醇+O2 CHOD △4-胆甾烯酮+H2O2
2H2O2+4-氨基安替比林+酚 POD 醌亚胺

醌亚胺的最大吸收峰在500nm,吸光度与标本中的胆固醇含量成正比。
胆固醇酶测定法的试剂中,除了上述三种酶、酚和4-氨基安替比林外,还有维持pH恒定的缓冲液、胆酸钠、表面活性剂以及稳定剂等。胆酸钠是为了提高胆固醇酯酶的活性,表面活性剂的作用是促进胆固醇从脂蛋白中释放出来。
酶法是常规应用方法,快速准确,标本用量少,便于自动生化分析仪作批量测定。
评价:
主要缺点是:
优点:本法灵敏度高、准确度高、精密度好,线性范围宽。
①某些胆固醇酯酶对胆固醇酯的水解不完全,不能用纯胆固醇结晶以有机
溶剂配制的溶液作为TC分析的校准液,而应以准确定值的血清作为标准,
此校准液(品)相当于三级标准。
②表面活性剂,如吐温-40可以干扰胆固醇酯酶的作用,而聚乙烯醇6000
可使结果提高1%~2%;
②本法具有氧化酶反应途径的共同缺陷,易受到一些还原性物质如尿酸、胆红素、维生素C和谷胱甘肽等的干扰。
【参考值】
血清总胆固醇合适范围:
≤ ,
边缘升高:~,
升高:≥ 。